—20℃）凍存——應(yīng)選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍，而后分裝10μl/瓶→凍存（-20℃）于冰箱備用。④關(guān)于Ab保存應(yīng)參照說明書。（3）Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低，因為Ag-Ab結(jié)合需在一定濃度范圍內(nèi)進行，若一方過剩則形成復(fù)合物小且少；極過剩時已形成的復(fù)合物亦會解體而呈現(xiàn)假陰性?！⒎茿b濃度越高越好。3．Ab滴片技術(shù)——所滴的抗體應(yīng)與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干，但不能干片。要領(lǐng)：甩凈組織周圍的水。4．PBS洗滌技術(shù)（1）洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(yīng)（平時Ab不可靠很純）（2）方法：洗三次，每次5分鐘。5．Ab孵育技術(shù)（1）必須在濕盒內(nèi)進行，以防抗體的蒸發(fā)和干片。（2）溫度與時間4℃：過夜；37℃：2hor參考說明書6．光鏡控制顯色方法（1）室內(nèi)操作：注意溫度與時間的關(guān)系，室溫較宜5分鐘。（2）染色稍淺亦可拿出，脫水，封片后顏色可加深。對照組和染色結(jié)果的評價從以下幾個方面綜合評價：1．陽性染色特點①Ag定位，胞漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。（非特異性～細胞與組織無區(qū)別）②染色強度不同：顏色深淺不一。上海轉(zhuǎn)錄組技術(shù)比較好的公司找融享生物。天津動物實驗免疫組化服務(wù)機構(gòu)

被檢測的物質(zhì)

組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。

6、特點

1）特異性強

免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時，才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高

在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

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冰凍切片是借助低溫冷凍將活檢組織快速凍結(jié)達到一定的硬度進行制片的一種方法，手術(shù)中等待冰凍快速病理報告，以病變性質(zhì)而決定手術(shù)方式和范圍。而及時、準確的發(fā)出報告需要高質(zhì)量的冰凍切片，鑒于冰凍切片常出現(xiàn)染色模糊不清的現(xiàn)象，對病理判斷造成困難，甚至造成誤診或漏診，實踐中我們發(fā)現(xiàn)和組織固定、染色時返藍有一定關(guān)系，為了提高冰凍制片質(zhì)量，我們將FAA、Bouin氏液、88酒精三種固定液作了比較，并在染色中加用促藍液，認為用88酒精固定液及染色時加用促藍液制作的冰凍切片質(zhì)量較理想，

是否有效的祛除了內(nèi)源性酶和生物素 應(yīng)注意的是，并不是每一種組織均需要祛除內(nèi)源性酶和生物素，但對于內(nèi)源性酶和生物素含量豐富的組織如肝臟、腎臟等，如染色效果不佳，均考慮此原因。處理方法為:（1）滅活堿性磷酸酶:常用的方法是將左旋咪唑（24mg/ml）加入底物液中，并保持pH值在7.6～8.2之間，即能祛除大部分內(nèi)源性堿性磷酸酶，對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶，可用50mmol/L的酒石酸;（2）飽和處理內(nèi)源性生物素:消除內(nèi)源性生物素的方法是事先滴加親和素以飽和內(nèi)源性生物素，使之不再有剩余的結(jié)合位點，具體操承接各類病理實驗 免疫熒光,HE染色服務(wù)實驗、極速周期、經(jīng)營豐富、高性價比、技術(shù)專業(yè)就找融享生物。

檢測中的顯色反應(yīng)免疫組化顯色是一種酶促反應(yīng)，它通過連結(jié)在抗原抗體復(fù)合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應(yīng)，生成有色的復(fù)合物沉淀在組織細胞中的抗原部位。由于標本組織來源不同，細胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應(yīng)所需時間不可能完全一致。整個免疫組化過程步驟較多，每步應(yīng)按操作要求嚴格操作，脫蠟時間一定要充分。每步PBS沖洗時間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，可以減少背景染色。滴加試劑時要均勻、足夠，要比切片上的組織界限寬出0.05~0.35cm防止出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。即使是同一種抗體，由于產(chǎn)品批號不同，其效價可能有差異，因此，新購進的抗體一定要進行預(yù)實驗，找出比較好條件并進行記錄。此外，組織浸液的溫度，切片烘烤的溫度控制，實驗操作過程中的室內(nèi)溫度及抗體的效價等都是影響免疫組化標記質(zhì)量的重要因素。耐心細致的工作態(tài)度，標準化、規(guī)范化的操作，是完成實驗的基本保證。免疫組化怎么做就找融享生物。天津動物實驗免疫組化

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它的原理

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學顯色原理情況，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng)，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，較終通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。

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