PCR- RFLP 法是先擴(kuò)增一基因或基因片段, 再用限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增片段, 然后電泳分酶 切片段。PCR- RFL P 分析細(xì)菌的 16S rRNA 基 因, 可鑒定到種和亞種的水平。16S rRNA 基因的 擴(kuò)增產(chǎn)物如用一種限制性內(nèi)切酶消化得到的圖譜 信息很少, 分辨率不高。因此, 對(duì)于某些菌種需要 兩種或三種不同的內(nèi)切酶方能作后續(xù)的鑒定。如 將該技術(shù)與 ARDRA( Amplified rDNA Restriction Analysis) 技術(shù)結(jié)合, 依據(jù)原核生物 rDNA 的保守 性, 將擴(kuò)增的 rDNA 進(jìn)行酶切, 然后通過(guò)酶切圖譜 來(lái)分析菌間的多樣性, 該法無(wú)需將試樣分純, 簡(jiǎn) 便、高效, 是一種很有發(fā)展前途的方法。上海融享生物科技有限公司主營(yíng)測(cè)序很多，其中ITS 銷很好。重慶真核微生物16S測(cè)序機(jī)構(gòu)電話

在細(xì)菌的系統(tǒng)分類學(xué)研究中有用的和常 用的分子鐘是 rRNA, 其種類少、含量大(約占細(xì)菌 RNA 含量的 80%), 分子大小適中, 存在于所有的 生物中, 特別是其進(jìn)化具有良好的時(shí)鐘性質(zhì), 在結(jié) 構(gòu)與功能上具有高度的保守性, 素有“細(xì)菌化石” 之稱。rRNA 是細(xì)菌和真核細(xì)胞核糖體的基本組 成部分, 編碼 rRNA 的基因是按 5′- 16S- 23S- 5S- 3′方式排列的, 由兩個(gè)非編碼的間隔區(qū)序列所分 開。16S rDNA、23S rDNA、5S rDNA 三部分組成 一個(gè) RNA 操縱子, 這個(gè)操縱子作為一個(gè)單位進(jìn) 行轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄后處理成為成熟的 16S、23S 和 5S rRNA。重慶真核微生物16S測(cè)序機(jī)構(gòu)電話上海融享生物科技有限公司測(cè)序的16s 擁有完善的售后服務(wù)。

１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因間區(qū)不但可以用于菌種間的鑒別，還 可

以用來(lái)分辨１６ＳｒＲＮＡ 基因不能鑒別的非常接近的菌種和種

內(nèi) 菌 株，是 １６ＳｒＲＮＡ 基因分析很好的補(bǔ)充。金 中 淦

等利用１６ＳｒＲＮＡ、１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因?qū)χ饕?

病原菌進(jìn)行檢測(cè)比較后認(rèn)為在細(xì)菌鑒定中，１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ

可作為比１６ＳｒＲＮＡ 基因更好的分子靶標(biāo)，可 以 在２４ｈ內(nèi) 將

病原菌的種類報(bào)告給臨床醫(yī)生。Ｚｈｕ等的 研 究 表 明１６Ｓ～

２３ＳｒＲＮＡ 基因分析 可 以 將１６ＳｒＲＮＡ 序 列 同 源 性 達(dá)９７％的

兩株黏質(zhì)沙雷菌區(qū)分開。根據(jù)１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因間區(qū)兩端

被高 度 保 守 的ｒＲＮＡ 所包圍的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可 利 用 其 兩 端 １６Ｓ

ｒＲＮＡ 及２３ＳｒＲＮＡ 保守區(qū)設(shè)計(jì)通用引物作上、下 游 引 物，特

異性擴(kuò)增特定細(xì)菌 的１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基 因 間 隔 區(qū)，根 據(jù) 片 段

數(shù)目、長(zhǎng)度、序列的多態(tài)性或測(cè)序來(lái)鑒別微生物。

原核生物(細(xì)菌、古菌) rRNA 按核酸的沉降系

數(shù)分為 3 種，分別為 5S、16S 和 23S。16S rRNA 是

核糖體 RNA 的一個(gè)亞基，16S rRNA 基因就是編碼

該亞基的基因。其存在于所有細(xì)菌染色體基因組

中，參與生物蛋白質(zhì)的合成過(guò)程，并在生物進(jìn)化的

漫長(zhǎng)歷程中保持一定的遺傳保守性，是細(xì)菌系統(tǒng)分

類研究中有用和常用的分子標(biāo)記。16S rRNA

基因分子大小適中(長(zhǎng)度約為 1540 bp)，在結(jié)構(gòu)與功

能上又具有高度的保守性，檢測(cè)方便并且與原核生

物的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)聯(lián)密切，因此逐漸成為常用的原

核生物標(biāo)記基因。16S rRNA 編碼基因序列共有

9 個(gè)保守區(qū)和 9 個(gè)高可變區(qū)，其中 V4?V6 區(qū)

數(shù)據(jù)庫(kù)信息全、特異性好，是細(xì)菌多樣性分析的常

用目標(biāo)區(qū)域。

上海融享生物科技有限公司測(cè)序的ITS 擁有完善的售后服務(wù)。

用下一代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing，NGS)測(cè)定

16S/18S/ITS 某個(gè)可變區(qū)的序列，可以反映環(huán)境樣

品在細(xì)菌、、古菌等組成的微生物群落之間的

差異，對(duì)研究海洋、土壤、宿主等不同環(huán)境中的

微生物群落組成及動(dòng)態(tài)變化有重要的指導(dǎo)作用，同

時(shí)也是系統(tǒng)發(fā)育和分類學(xué)研究中一種使用的方法。

顯，能夠反映出種屬間甚至菌株間的差異。此外，

ITS 序列片段較小(ITS1 和 ITS2 長(zhǎng)度分別為 350 bp

和 400 bp 左右，但不同物種之間存在一定差異)，

易于分析。也就是說(shuō)，ITS 具有更高的擴(kuò)增和測(cè)序

成功率以及分類學(xué)分辨率，目前已被應(yīng)用于真

菌不同種屬的系統(tǒng)發(fā)育分析。 您喜歡16s 的這些特點(diǎn)嗎？重慶真核微生物16S測(cè)序機(jī)構(gòu)電話

18S 的各種測(cè)序應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。重慶真核微生物16S測(cè)序機(jī)構(gòu)電話

2000 年, M Manzano 等利用溫度梯度凝膠電泳的方法 分析 16S rRNA 對(duì)分離自食物中的利斯特氏菌進(jìn)行了鑒定。 2001 年, HJ Monstein 等利用溫度梯度凝膠 電泳和 PCR 擴(kuò)增 16S rRNA 的 V6 區(qū) ( 可變區(qū)) 片段的方法對(duì) 16 株腸球菌進(jìn)行了鑒定。2001 年, 沈永才等利用 16S rRNA 的 PCR 法鑒定了 8 株 雙歧桿菌, 并用 16S rRNA 熒光定量 PCR 法對(duì)雙 歧桿菌進(jìn)行了定量檢測(cè)。2002 年, A Manero 等對(duì) 利用 16S rRNA 探針雜交的方法鑒定腸球菌屬細(xì) 菌進(jìn)行綜述。2002 年, Y Woo- PatrickC 等通過(guò) 16S rRNA 序列分析的方法, 從一位菌血癥膽囊 炎患者體內(nèi)檢測(cè)到了唾液乳桿菌的存在。2003 年, Y Seto 等對(duì) 16S rRNA 序列特定長(zhǎng)度片段進(jìn) 行 分 析 , 對(duì) 人 體 糞 便 樣 品 中 嗜 酸 乳 桿 菌 ( Lactobacillus acidophilus) 的分布情況進(jìn)行了檢 測(cè)。2003 年, JR Byun 等利用分析 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)序列的方法對(duì)一株鼠李糖乳桿菌 ( Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103) 進(jìn)行了鑒 定, 并與干酪乳桿菌( L. casei) 、嗜酸乳桿菌( L. acidophilus) 和瑞氏乳桿菌( L. helveticus) 的 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)片段進(jìn)行了比較。重慶真核微生物16S測(cè)序機(jī)構(gòu)電話