激光掃描共聚焦顯微鏡（LaserScanningCon-focalMicroscope，LSCM）是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種新型高精度顯微鏡。它在普通熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用可激發(fā)的熒光探針，采用敏感的光電倍增管作為檢測器，利用計(jì)算機(jī)控制掃描反射鏡并進(jìn)行圖像采集、處理和分析。激光掃描共聚焦顯微技術(shù)不僅可用于觀察各種固定的細(xì)胞和結(jié)構(gòu)，還可對活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和離子的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察和測定。目前，這種技術(shù)已用于細(xì)胞形態(tài)定位、三維結(jié)構(gòu)重建、細(xì)胞內(nèi)離子動(dòng)態(tài)變化過程等研究，并與定量熒光測定、定量圖像分析等實(shí)用研究手段和技術(shù)相結(jié)合，在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等分子細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。 雙光子顯微鏡使用時(shí)，需要注意哪些問題呢？河南生物顯微鏡優(yōu)質(zhì)推薦

通常來說國產(chǎn)顯微鏡與進(jìn)口顯微鏡有如下不同之處：

1、 價(jià)格， 國產(chǎn)顯微鏡價(jià)格低廉， 一般從幾千到幾萬價(jià)格不等， 比較適合檢驗(yàn)要求不高，

設(shè)備資金有限的中小企業(yè)。 進(jìn)口顯微鏡通常是從幾萬到幾十萬， 因廠家和型號的不同價(jià)格變

化較大， 主要使用于檢驗(yàn)要求較高采購資金比較充裕的中大型企業(yè)。

2、 產(chǎn)品質(zhì)量， 雖然國產(chǎn)設(shè)備還在發(fā)展進(jìn)步， 但真實(shí)的講產(chǎn)品質(zhì)量和技術(shù)方面與國外進(jìn)

口的差距還是很大的， 個(gè)人認(rèn)為短期內(nèi)是無法追趕上了。

3、 光學(xué)系統(tǒng)： 國產(chǎn)顯微鏡大多數(shù)采用的是有限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 因此產(chǎn)品的功能都比較簡

單， 部分高端產(chǎn)品采用的是無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 但相關(guān)技術(shù)還不是很成熟。 進(jìn)口廠家采用的都

是無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 其中德國蔡司公司的 ICCS 光學(xué)系統(tǒng)最為先進(jìn)。 四川生物顯微鏡優(yōu)質(zhì)推薦激光掃描共聚焦顯微鏡常見故障及相應(yīng)解決方法。

3． 雙光子顯微鏡的激光器有何特別之處？

雙光子吸收幾率依賴于兩個(gè)入射光子在空間和時(shí)間上的重合程度（兩個(gè)光子必須在 10－18 秒內(nèi)到達(dá)） 。 雙

光子吸收截面很小， 只有在具有很大光子流量的區(qū)域的熒光團(tuán)才會(huì)被激發(fā)。 因此所用激光器多為鈦寶石激

光器， 可以達(dá)到皮秒或者飛秒級的掃描速度， 且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率， 從而可以減小

或者消除光漂白和光毒作用。 最主要的是在一個(gè)很小的范圍提供非常高密度的光子， 可以保證雙光子的同

時(shí)激發(fā)。

    掃描探針顯微鏡（SPM） 是近幾十年在表面特征表面形貌觀測方面最重大的成果之一。

   1966 年 Russell Young 提出可以利用金屬探針與樣品之間的微弱電流來對樣品的表面形

貌進(jìn)行表征， 并在 1971 年聯(lián)名他的合作者在《物理評論快報(bào)》 上提出了這種探針式表面測

量儀， 測量儀的基本原理是通過探針與樣品之間的電流大小來體現(xiàn)探針與樣品之間的間距。

在之后的 1972 年， Young 給出了探測儀的具體結(jié)構(gòu)與應(yīng)用實(shí)例， 這是掃描探測顯微鏡的雛

形。

1978 年， 蘇黎世研究所的兩位物理學(xué)家系統(tǒng)論證了掃描隧道顯微鏡， 并于 1981 年把實(shí)

體研制成功， 觀察到了 Si（111） 的表面原子結(jié)構(gòu)。 這個(gè)表面物理探測器的工作原理是量子

隧穿效應(yīng)。 當(dāng)金屬探針與樣品之間的距離只有幾納米的時(shí)候， 會(huì)產(chǎn)生隧穿電流， 而這個(gè)隧穿

電流對于距離十分敏感， 當(dāng)距離變化 0.1 納米時(shí)隧穿電流會(huì)發(fā)生量級的變化。 借助這個(gè)效應(yīng)，

掃描隧道顯微鏡的垂直分辨率高達(dá) 0.01nm， 放大倍數(shù)達(dá)到了幾億倍。 借此， 人類得

到了原子圖像， 對于其周邊學(xué)科有著里程碑式的意義。 其研發(fā)者 G.Binning 和 H.Rohrer 也由

此獲得了 1986 年的諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)。

雙光子顯微鏡常見故障及相應(yīng)解決方法。

在空氣的環(huán)境下， 用壓電晶體微懸臂的共振頻率或接近這一頻率

來振蕩懸臂， 從而實(shí)現(xiàn)了 輕敲模式的成像原理。 當(dāng)針尖未與表面接觸

時(shí)， 壓電的運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生了 懸臂大振幅的振蕩。 。 振蕩的針尖朝向樣品表面

運(yùn)動(dòng)直到針尖開始輕輕地接觸到樣品或敲擊到表面。 微懸臂的振蕩就

會(huì)由于針尖與表面接觸引起的能量的損失而必然地下降。 這種振幅交

替下降用于檢測并測量表面形貌。

檢測器測量到這些交替變化的振幅值, , 再通過反饋回路, , 調(diào)整針尖

與樣品之間的距離， 保證振幅恒定在某一個(gè)恒定值, , 這樣針尖在掃描

過程中的運(yùn)動(dòng)軌跡就反映了 樣品的表面形 貌 雙光子顯微鏡的歷史。四川正規(guī)顯微鏡需要多少錢

激光掃描共聚焦顯微鏡價(jià)格。河南生物顯微鏡優(yōu)質(zhì)推薦

    實(shí)際上，衍射極限是一種遠(yuǎn)場(far-field)效應(yīng)，在近場(near-field)條件下無效。因此早期的一些嘗試突破光學(xué)衍射極限的努力都是基于近場光學(xué)成像的。像這次諾貝爾獎(jiǎng)得主EricBetzig就早在1993年發(fā)展了掃描近場光學(xué)顯微鏡，實(shí)現(xiàn)了室溫下的單分子超分辨率成像。然而，近場光學(xué)顯微鏡無法用于細(xì)胞內(nèi)部的成像，因此在生物領(lǐng)域的應(yīng)用一直沒有發(fā)展起來。后期的各種“突破”光學(xué)衍射極限的努力都是在遠(yuǎn)場條件下發(fā)展起來的。超分辨率顯微成像一般指在遠(yuǎn)場條件下基于熒光的、“突破”衍射極限的光學(xué)顯微成像技術(shù)。熒光是物質(zhì)吸收光照后發(fā)出的一類光。物質(zhì)分子中的電子分布在不同的能級上。當(dāng)一束光打到分子，分子具有一定的概率吸收光子，同時(shí)其處在基態(tài)的電子會(huì)躍遷到更高能量的激發(fā)態(tài)能級。處在激發(fā)態(tài)的電子有多種途徑回到基態(tài)，其中一條途徑就是發(fā)出一個(gè)光子(熒光)，釋放能量回到基態(tài)。 河南生物顯微鏡優(yōu)質(zhì)推薦

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