細(xì)胞爬片免疫組化檢測實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

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7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。

11、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 免疫組化結(jié)果分析是什么？細(xì)胞免疫組化多少錢

免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié)：

?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時(shí)，使片子始終浸沒在修復(fù)液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時(shí)間和結(jié)合效果好，不要超過1h，容易過染。

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?二抗使用：兩個(gè)二抗放大信號或一個(gè)二抗；若抗體信號強(qiáng)，可不用放大信號，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時(shí)間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時(shí)，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個(gè)操作過程中在顯色之前，一定不能干片。 遼寧組織免疫組化推薦免疫組化失敗的原因？

關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。

免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對于反應(yīng)性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí)，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá)，bcl-2陽性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細(xì)胞增生的程度作出評價(jià)，從而提示增生細(xì)胞的良惡性。免疫組化怎么做？步驟方法？

確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位，臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源，進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。做免疫組化的目的是什么？青海大鼠免疫組化是什么

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免疫組化（IHC）利用抗體檢測組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。

英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包，自有專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室，可高效完成免疫組化檢測。

抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測或熒光染料熒光檢測進(jìn)行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA，但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達(dá)譜對病理學(xué)家以及作為診斷工具都具有重要意義。

IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復(fù)的染色方案，而該方案應(yīng)使用高質(zhì)量的特異性試劑。 細(xì)胞免疫組化多少錢