免疫組化(IHC)利用抗體檢測(cè)組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。
英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包,自有專(zhuān)業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室,可高效完成免疫組化檢測(cè)。
抗體-抗原的相互作用通過(guò)有色酶底物顯色檢測(cè)或熒光染料熒光檢測(cè)進(jìn)行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA,但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達(dá)譜對(duì)病理學(xué)家以及作為診斷工具都具有重要意義。
IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復(fù)的染色方案,而該方案應(yīng)使用高質(zhì)量的特異性試劑。 免疫組化公司哪家好?黑龍江做得好的免疫組化要多久
細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。
4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
5、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過(guò)夜。
6、PBS洗3次,每次5min。
英瀚斯生物,細(xì)胞、動(dòng)物、臨床樣本免疫組化檢測(cè)都可完成!
7、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。
8、PBS洗3次,每次5min。
9、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
10、顯色完全后,蒸餾水或自來(lái)水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來(lái)水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
11、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。 黑龍江做得好的免疫組化要多久免疫組化樣本如何處理?
免疫組化的特點(diǎn):
1)特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí),才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2)敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。
3)定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。
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免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來(lái)檢測(cè)組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來(lái)自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類(lèi)似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry,簡(jiǎn)稱(chēng)ICC)。這兩個(gè)詞大家經(jīng)?;熘?,看著好像差不多,但實(shí)際上還是有點(diǎn)區(qū)別。IHCvsICC對(duì)于IHC,組織是來(lái)自患者或動(dòng)物,經(jīng)過(guò)冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過(guò)這種方法,研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位,同時(shí)維持周?chē)M織的原先結(jié)構(gòu)。對(duì)于ICC,大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除,只剩下整個(gè)細(xì)胞來(lái)染色。ICC的來(lái)源可以是細(xì)胞懸液,來(lái)自患者或動(dòng)物(如血涂片、拭子等),或在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系。 英瀚斯實(shí)驗(yàn)外包,病理染色切片免疫組化,效率高!
免疫組化有哪幾種分類(lèi) ?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類(lèi),如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱(chēng)一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(PAP)法;親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 英瀚斯生物,專(zhuān)業(yè)承接免疫組化等各類(lèi)病理染色檢測(cè)!寧夏細(xì)胞免疫組化要多少錢(qián)
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確定cancer分期,免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床可以進(jìn)行處理哦,英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo),與是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲密切相關(guān),而通過(guò)免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分,用于區(qū)分原位*和浸潤(rùn)*,一旦上皮性*突破基膜為浸潤(rùn),未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物第八因子相關(guān)蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對(duì)血管或淋巴管的浸潤(rùn)。因此對(duì)許多cancer的良惡性鑒別及有無(wú)血管或淋巴管浸潤(rùn),免疫組化結(jié)果作為主要的鑒別依據(jù)。黑龍江做得好的免疫組化要多久