英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù)，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過(guò)夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來(lái)水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。

12、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。 常見(jiàn)的免疫組化方法有哪些？新疆動(dòng)物組織免疫組化檢測(cè)

免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見(jiàn)信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察，但不適合長(zhǎng)期保存。此外，還有熒光顯色系統(tǒng)，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 安徽大鼠免疫組化要多久免疫組化的樣本保存要求是什么？

關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來(lái)源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來(lái)源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫(xiě)的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過(guò)高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒(méi)有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無(wú)關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無(wú)法封閉Fc受體。

免疫組化的應(yīng)用領(lǐng)域

免疫組化在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。在**學(xué)中，免疫組化通常被用于**標(biāo)志物的檢測(cè)，幫助確定**的類型、分級(jí)和預(yù)后。例如，免疫組化通過(guò)檢測(cè)ER、PR和HER2的表達(dá)，可以指導(dǎo)乳腺*的治療方案。在神經(jīng)科學(xué)中，免疫組化用于研究神經(jīng)元的分布和功能。在免疫學(xué)中，免疫組化可以用于檢測(cè)炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞在組織中的分布和水平。此外，免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)還被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、病理學(xué)和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。 免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點(diǎn)！

免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用？

定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢(shì)。相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析優(yōu)先方法，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性；確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位；對(duì)某類**進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型；軟組織**診斷；為臨床提供治療方案的選擇；近年來(lái)，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)，使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時(shí)，準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。

免疫組化方法步驟是什么？安徽大鼠免疫組化要多久

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免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。 新疆動(dòng)物組織免疫組化檢測(cè)