外泌體可以由體內或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術,分別為基于質量密度的超速離心技術、基于粒徑大小的分離技術、基于溶解性質的聚合物沉淀技術、基于免疫親和原理的分離技術和基于流體性質的微流控技術。臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。b細胞外泌體

通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養(yǎng)液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。umibio 提外泌體試劑盒外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。

外泌體基礎醫(yī)學和臨床應用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質組分,并在100000×g~200000×g的轉速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術被認為是外泌體分離的“金標準”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉子類型、旋轉半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。

結果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質和RNA。應用Tim4的外泌體強結合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導書中對該技術進行詳細說明，這項技術的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復性確認帶來困難。近年，隨著國際細胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦，提案MISEV指南作為國際標準，計劃或已經(jīng)開始進行EV研究的科學家請務必閱讀這些方針。外泌體與各種疾病的相關性被檢測出，特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體。

一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易?、熱休克蛋白家族。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白（RPS3）、信號轉導因子（黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子、細胞骨架蛋白以及泛素等。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體。b細胞外泌體

外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細胞類型或組織的功能。b細胞外泌體

外泌體（Exosome）是一種直徑為30-100nm的納米級脂質包裹體結構，內部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質。外泌體由細胞分泌釋放出來，在血液等體液內傳播，較后又可被其他細胞吞噬，是細胞間通訊的重要介質。源自于間充質干細胞內分泌的外泌體，富含一百多種胞外基質蛋白，mRNA信使核糖核酸和多重生長因子。在臨床上，干細胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍，再生健康皮膚；在護膚方面，主要是對外傷受損、衰老中毒皮膚進行修復，比較全的調理皮膚、改善膚質，令肌膚恢復年輕、健康的狀態(tài)。b細胞外泌體