外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。作為細(xì)胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍，但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實驗技術(shù)，關(guān)于需要改進的課題存在很多。例如，外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)，給后續(xù)實驗產(chǎn)生了許多障礙?？贵w親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體，無法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法，又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標(biāo)記蛋白。實際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。福建外泌體tmt

利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一，操作時往往需要細(xì)胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白(Alix)等，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標(biāo)志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì)，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。外泌體亞型外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標(biāo)組織的特點等進行針對性的調(diào)整。

外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān)，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點或分子標(biāo)志物。對外泌體的研究，將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機制，為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持。外泌體可以通過轉(zhuǎn)運蛋白和miRNAs進行細(xì)胞間交流，從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境。細(xì)胞內(nèi)多泡體（MVBs）與細(xì)胞膜融合，釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外，被其他細(xì)胞攝取，通過細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物，在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程。

與PC-3細(xì)胞相比，PC-3細(xì)胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來源細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關(guān)，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細(xì)胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來源細(xì)胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結(jié)構(gòu)能夠保護其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。干細(xì)胞外泌體可用于中風(fēng)的治理，改善神經(jīng)預(yù)后，增加血管與神經(jīng)生成。

瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中去，同時，外泌體能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更長時間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術(shù)的進步，已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領(lǐng)域，外泌體中存在黑色素瘤標(biāo)志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關(guān)蛋白，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者，通過檢測MIA和S100B表達水平對黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說，液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來源上的延伸，進一步豐富了檢測手段，而隨著外泌體的不斷揭秘，相信其會在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來越重要的作用。通過壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。外泌體亞型

外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。福建外泌體tmt

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。福建外泌體tmt