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單分子陣列數(shù)字ELISA易用性

來源: 發(fā)布時間:2024-12-24

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品;

先進新型的單分子檢測方法的普及版;每個生物/醫(yī)學實驗室都用得起的單分子免疫檢測;使用現(xiàn)有平臺就能做的單分子免疫檢測;

芯棄疾.數(shù)字ELISA-獨特創(chuàng)新技術(shù)方案:單分子芯片陣列化技術(shù)+POCT小型化:使用微米級捕獲結(jié)構(gòu)+二次流原理,磁珠捕獲量更多(數(shù)十萬磁珠反應(yīng)載體)、更穩(wěn)定捕獲;絕大部分試劑反應(yīng)遷移到芯片上,能真正實現(xiàn)“芯片實驗室”(LabonChip);

同樣的檢測方案,通過數(shù)十萬個磁珠陣列中,逐一檢測到每個陽性磁珠信號,得到高靈敏的檢測結(jié)果。 5)數(shù)字化高敏ELISA芯片試劑盒,微量樣本可同時測2-4個指標;單分子陣列數(shù)字ELISA易用性

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每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測

為了證明檢測極低濃度的可能診斷價值使用數(shù)字ELISA檢測血液中的蛋白質(zhì),對接受治理性前列腺切除術(shù)(RP)的患者血清樣本中的PSA進行了測量。PSA是前列腺病的血清生物標志物病癥既用作篩查工具,也用于監(jiān)測住院患者的復(fù)發(fā)接受治理性前列腺切除術(shù)28。治理性前列腺切除術(shù)后,絕大多數(shù)PSA被消除,水平低于標準商用檢測方法的檢測限(3pM或0.1ng/mL)。定期監(jiān)測這些患者的PSA恢復(fù)情況可以檢測前列腺病的復(fù)發(fā),但術(shù)后幾年內(nèi)生化復(fù)發(fā)可能不會被發(fā)現(xiàn)。 單分子蛋白數(shù)字ELISA靈敏度芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,多重檢測,同一樣本就能測試2-6項指標;

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我們已經(jīng)開發(fā)了兩種臨床相關(guān)蛋白的檢測方法——前列腺特異性抗原(PSA)和腫瘤壞死因子α(TNF-α),以確定高酶標記物單體提供的靈敏度轉(zhuǎn)化為高靈敏度的檢測方法血液中的蛋白質(zhì)。兩種蛋白質(zhì)的數(shù)字ELISA如圖1所示。開發(fā)這些試驗的關(guān)鍵參數(shù)是:珠子濃度和兩種標記試劑(檢測試劑和酶偶聯(lián)物)的濃度。珠子濃度的選擇取決于幾個相互競爭的因素。首先,足夠的珠子必須在場以從熱力學和動力學中捕獲大部分目標分析物從熱力學角度看,100μL中有20萬個珠子,每個珠子大約有8萬個與之結(jié)合的抗體25相當于約0.3nM的抗體濃度,在該濃度下,抗體-蛋白平衡導(dǎo)致高捕獲效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未發(fā)表工作)。

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動力學上,對于200,000個微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質(zhì)將在不到1min的時間內(nèi)擴散80μm。表明,在2小時的孵育過程中,蛋白質(zhì)分子的捕獲不會受到限制動力學上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個珠子加載到50,000孔陣列中,通常會導(dǎo)致20,000–30,000個微球被困在1mL孔中。對于典型的背景信號為1%活性微球(見下文),這種裝載導(dǎo)致背景信號為200-300個活性微球檢測到,對應(yīng)于泊松噪聲的可接受變異系數(shù)(CV)為6-7%。第三,過高的微球濃度可能導(dǎo)致:a)非特異性結(jié)合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過低,導(dǎo)致活性微球的比例過低,從而導(dǎo)致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數(shù)字ELISA。同時,為了獲得可接受的背景信號(1%)和泊松噪聲)。 每個生物/醫(yī)學實驗室都用得起的單分子免疫檢測;

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芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品;具有以下特點:多重、超敏微量、極速靈活、開放; 
只有少量分泌蛋白可測量的可能性突顯了蛋白質(zhì)測量領(lǐng)域面臨的挑戰(zhàn):醫(yī)學上相關(guān)的生物標志物可能存在于非常低的豐度中。免疫測定仍然是是蛋白質(zhì)生物標志物敏感和特異性測量的基礎(chǔ)。然而,傳統(tǒng)的免疫分析技術(shù)在檢測不可測量的生物標志物時靈敏度不足,這些生物標志物肯定位于當前可檢測范圍之下。主流的傳統(tǒng)免疫分析方法——包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、化學發(fā)光和電化學發(fā)光——的靈敏度下限約為10^-13M(~<0.1pM)。許多降低靈敏度的方法已被描述,包括拉曼增強信號檢測、電感耦合等離子體質(zhì)譜,但這些方法的數(shù)據(jù)表明其成功有限。非常規(guī)方法如亞飛摩爾級檢測具有明顯的權(quán)衡,例如程序較長或無法提供定量答案。
新型的單分子檢測方法的普及版;芯棄疾數(shù)字ELISA多重檢測

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    芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測我們的方法利用了亞飛克爾反應(yīng)室陣列(圖1C)我們稱之為單分子陣列(SiMoA)——可以分離和檢測單個酶分子20-24。這種方法借鑒了Walt等人20-23的工作陣列用于研究單個酶的動力學和抑制作用。我們的目標是利用捕獲和檢測單個酶的能力來檢測用酶標記的單個蛋白質(zhì)分子。在這個單分子免疫測定的第一步(圖1A),在微球(直徑μm)上形成一個三明治抗體復(fù)合物,結(jié)合的復(fù)合物用酶標記,如同常規(guī)的基于微球的ELISA。當測定含有極低濃度蛋白質(zhì)的樣品,蛋白質(zhì)的比值分子(以及由此產(chǎn)生的酶標記復(fù)合物)與微球的比例很?。ㄍǔP∮?:1),因此含有標記免疫復(fù)合物的微球百分比遵循泊松分布,導(dǎo)致單個微球上存在單一免疫復(fù)合物。例如,如果在(3000個分子)的蛋白質(zhì)中捕獲并標記了50μM的蛋白質(zhì),并且在200,000個微球上進行標記,則珠子,然后,。無法檢測到這些低數(shù)量的酶使用標準檢測技術(shù)(例如,平板閱讀器)的標簽,因為熒光染料由每種酶生成的產(chǎn)物擴散到一個大卵試驗體積(通常為),并進入其中需要數(shù)十萬種酶標簽才能產(chǎn)生高于該水平的熒光信號背景。 單分子陣列數(shù)字ELISA易用性

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