**近幾年來，Piezo-ICSI法（壓電顯微受精法）被高度重視。使用了Piezo-ICSI法，與常規(guī)的顯微受精技術(shù)相比，對(duì)卵子的損害更小。結(jié)果顯示，用Piezo法會(huì)提高受精率，之后受精卵的發(fā)育也更好。Piezo-ICSI壓電顯微受精方法，與傳統(tǒng)ICSI顯微受精方式不同，采用平口而不是尖口的精子注射針，通過超音振動(dòng)技術(shù)打開卵子透明帶再將精子注入卵子，從而一定程度上減少了注射過程對(duì)卵子產(chǎn)生的損害，使高齡女性胚胎養(yǎng)囊率有所提升。臨床數(shù)據(jù)顯示，特別是針對(duì)一些大齡及反復(fù)受精失敗的情況，Piezo-ICSI比常規(guī)ICSI方法的受精率從66.4%提高到79.4%，受精以后的退化率（即停止分裂）從18.6%降低到11.9%。而妊娠率從14.9%提高到23.1%。操作穩(wěn)定性更強(qiáng)事實(shí)上相較Piezo法，常規(guī)的顯微受精方法從穩(wěn)定性上更難操作。用汽車來舉例的話，Piezo法相當(dāng)于自動(dòng)檔汽車，常規(guī)的顯微受精方法相當(dāng)于手動(dòng)檔汽車，Piezo法可以縮短培養(yǎng)師的培訓(xùn)時(shí)間。日本只有10家能做Piezo即使在日本，采用Piezo法的醫(yī)院也不太多。在日本有600家進(jìn)行體外受精、顯微受精的醫(yī)院，而采用Piezo法的醫(yī)院或許也就10家左右。從現(xiàn)在起Piezo法的優(yōu)勢會(huì)得以重新評(píng)估，或許10年，20年后會(huì)在世界各地得以普及。“PIEZO PMM 6”是一種壓電顯微操作系統(tǒng)，作為壓電注射的先驅(qū)，投入了大量的資源進(jìn)行其研發(fā)。深圳細(xì)胞內(nèi)膜打孔壓電平口針

“ICSI”（intracytoplasmicsperminjection）指卵胞漿單精子注射，其操作主要涉及“精子制動(dòng)-精子拾取-破膜-注射”幾個(gè)步驟，其中在“破膜”（即使用注射針刺破卵膜，以便將單個(gè)精子送入卵胞漿）這一步，部分患者的卵子會(huì)出現(xiàn)“無破膜感”這一特征，這是怎么回事呢？原來，進(jìn)行ICSI操作的時(shí)候，并不是直接用注射針徑直扎破卵膜。技術(shù)書籍這樣描述道：“調(diào)節(jié)顯微操作作針和卵膜至同一水平面，將注射針中的精子推至針尖處，注射針從卵子3點(diǎn)鐘位置穿入透明帶并繼續(xù)進(jìn)針，至卵中心或越過中心位置。由于卵膜的彈性，進(jìn)針處卵膜出現(xiàn)‘漏斗狀’，但卵膜仍未破裂，需輕微回吸注射針以確認(rèn)膜破裂。一旦刺破卵膜可見到胞漿和精子的一個(gè)‘快速反流’的過程或可見卵膜‘回彈’現(xiàn)象，之后將精子注入卵子胞質(zhì)內(nèi)。這是正常情況下的破膜操作，而文章開頭提到的“無破膜感”，則是指注射針穿入透明帶的同時(shí)也立即穿透卵膜，不形成漏斗狀結(jié)構(gòu)，看不到胞漿的快速返流或回彈現(xiàn)象。學(xué)術(shù)界給具有這一特征的卵子細(xì)胞膜起了個(gè)特有名稱——脆性卵膜。上海prime tech壓電活檢PMM 6 MB-D-2中等力度輸出型號(hào)，適用于ICSI、ES細(xì)胞注射、活檢操作等。

為什么具有“脆性卵膜”的卵子ICSI后容易退化？如下：一、卵子成熟度不足。卵子的成熟包括核成熟（以排出***極體為標(biāo)志）以及胞質(zhì)成熟，而胞質(zhì)成熟往往滯后于核成熟，兩者并不完全同步。有對(duì)照研究表明，脆性卵膜組的成熟卵細(xì)胞比例***低于正常破膜組，ICSI后卵子退化率也高于正常破膜組，這提示了卵子成熟度與卵膜脆性具有一定的相關(guān)性，并**終影響了卵子ICSI后是否存活。二、雌***水平。到目前為止，關(guān)于雌***水平對(duì)脆性卵膜的影響，現(xiàn)有的研究結(jié)論并不一致，但歸根到底仍然可能是通過影響卵子成熟來改變卵膜的特性。三、ICSI機(jī)械操作。一方面ICSI是侵襲性操作，可能破壞卵膜、細(xì)胞骨架等細(xì)胞器，另一方面是具有脆性卵膜的卵子缺乏“漏斗”的保護(hù)作用，細(xì)胞骨架和卵膜更容易在ICSI過程中崩解。為避免脆性卵膜卵子ICSI后退化，除了改善注射方式（如進(jìn)針前利用激光穿透或削薄透明帶，操作盡可能輕柔等），還可采用改進(jìn)的Piezo-ICSI（壓電脈沖破膜輔助ICSI），能有效改善注射后卵子退化的情況。此外，在臨床促排卵方面，也可考慮調(diào)整藥物用量，在保證卵泡大小均勻的情況下，盡量推遲扳機(jī)時(shí)間，提高卵母細(xì)胞成熟度，減輕ICSI后卵子退化的比例，以盡可能保證ART***的效果。

Piezo-ICSI程序:使用直徑100-mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿上蓋,準(zhǔn)備操作盤；按照Piezo操作系統(tǒng)的要求，將4μL左右的汞從后部裝入注射針中，輕輕將汞推至針尖處，在20-25℃室溫下，準(zhǔn)備進(jìn)行顯微操作。具體操作前，首先取10枚卵母細(xì)胞置于15L含3%suerose的HEPES-CZB操作滴中備用；然后將2.5μL精子溶液與5pLHEPES-CZB+12%PVP-360操作滴充分混合；再將單個(gè)精子從尾部吸入注射針，用Piezo脈沖從頸部斷開頭和尾；連續(xù)剪切5個(gè)精子后，將吸入全部精子頭的注射針轉(zhuǎn)移到放置卵母細(xì)胞的操作滴中，準(zhǔn)備將精子頭逐個(gè)注射至卵母細(xì)胞質(zhì)中。注射時(shí)，從時(shí)鐘9點(diǎn)的方向吸住卵母細(xì)胞，使紡錘體保持在6點(diǎn)或12點(diǎn)的位置，從3點(diǎn)的方向輕輕進(jìn)針，同時(shí)用Piezo脈沖擊穿透明帶，將透明帶碎片吹出注射針的同時(shí)，將精子頭吹至針尖處，繼續(xù)進(jìn)針，直至針尖插入卵母細(xì)胞深處，幾乎貼近對(duì)側(cè)質(zhì)膜時(shí)，用Piezo弱脈沖擊穿卵母細(xì)胞質(zhì)膜，將精子頭吐出，回吸注入卵內(nèi)多余的操作液，輕輕退針，完成一次注射。依次操作，盡快實(shí)現(xiàn)該批卵母細(xì)胞的注射，室溫放置5min,然后用大量CZB溶液洗滌ICSI胚胎，并且移入CO?箱培養(yǎng)。依法進(jìn)行第二批卵母細(xì)胞的精子頭注射，在注射HCG后17h,完成全部卵母細(xì)胞的精子注射。壓電式顯微操作儀PMM可用于ES細(xì)胞注射等實(shí)驗(yàn)。

輔助生殖4大通用技能一技能：人工授精二技能：體外受精三技能：卵巢移植四技能：單精子顯微注射技術(shù)一般而言，體外受精是妥妥的主加技能，應(yīng)用***。1.單精子顯微注射技術(shù)單精子顯微注射技術(shù)（簡稱ICSI，即Intracytoplasmicsperminjection的英文縮寫）指胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù)。該技術(shù)是借助顯微操作系統(tǒng)將單個(gè)精子頭注入小鼠卵子胞漿內(nèi),使卵子受精，體外培養(yǎng)到早期胚胎，再放回母體子宮內(nèi)發(fā)育著床。在臨床上，ICSI即第二代“試管嬰兒技術(shù)”。PMM和傳統(tǒng)方法相比提高了速度和準(zhǔn)確率,也就是說增加了效率。深圳細(xì)胞內(nèi)膜打孔壓電轉(zhuǎn)基因

PMM 壓電顯微操作儀提高ICSI成功率。深圳細(xì)胞內(nèi)膜打孔壓電平口針

注射—將含一個(gè)已制動(dòng)精子的注射管輕柔刺破透明帶和卵膜，進(jìn)入卵母細(xì)胞中心。注入精子時(shí)，應(yīng)盡可能少地帶入培養(yǎng)液。之后使用負(fù)壓破壞卵膜，隨后輕柔抽吸細(xì)胞質(zhì)。精子置入、穿過卵膜和抽吸細(xì)胞質(zhì)以***卵母細(xì)胞的不同方法對(duì)受精和胚胎發(fā)育率的影響是一個(gè)研究熱點(diǎn)。壓電輔助的ICSI是一種新型方法，目前已在有ICSI結(jié)局不良病史和MⅡ期卵母細(xì)胞有限的患者中使用。在ICSI操作過程中，該技術(shù)對(duì)卵母細(xì)胞的損傷較小且可改善受精率和胚胎質(zhì)量。目前使用壓電驅(qū)動(dòng)管的新型ICSI注射技術(shù)已成功用于多種哺乳動(dòng)物。由于該注射器采用超聲切割力(而不是刺穿力)穿透卵膜，注射過程中卵母細(xì)胞幾乎沒有變形，因此其對(duì)卵母細(xì)胞的損傷大幅減少。該技術(shù)實(shí)現(xiàn)的存活率和成功率同樣高。注射后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方案培養(yǎng)卵母細(xì)胞。受精I(xiàn)CSI后，受精率為50%-80%。雖然ICSI不可保證一定受精，但完全受精失敗的發(fā)生率較低，通常發(fā)生于獲卵數(shù)較低的周期。受精失敗的原因通常不是未置入精子或卵母細(xì)胞排出精子。其可能是由于卵母細(xì)胞***失敗，這通常與卵母細(xì)胞質(zhì)量較差或精子無活性有關(guān)。深圳細(xì)胞內(nèi)膜打孔壓電平口針