cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。

再說一下關于種板設置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設置6個復孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會省很多力氣，但是也會增大組內誤差。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。

能力有限，表達不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標是共同進步，哈哈。 主要是重復性優(yōu)于MTT；江蘇cck8統(tǒng)計分析

沒有做過MTT實驗，但其實原理及目的都是一樣的（反應機理不一樣）。都說CCK8簡單點而且數(shù)據更穩(wěn)定，所以就用了這個試劑盒。CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值，因為那是反復驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提，如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗那就另當別論了。天津cck8增殖曲線接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不一致。

制作標準曲線1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。

四、方法及步驟：實驗一：細胞增殖分析1、制備細胞懸液：細胞計數(shù)。2、接種到96孔板中：根據合適的鋪板細胞數(shù)（約1-2×104），每孔約100ul細胞懸液，同樣的樣本可做4-6個重復。3、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。4、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議將***頭浸入培養(yǎng)液中加入且在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻?；蛘咧苯优渲煤?0%CCK8的培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配），以換液的形式加入。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。

CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；北京cck8檢測計算

CCK8雖好,這些情況下不建議用!江蘇cck8統(tǒng)計分析

實驗原理：CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。江蘇cck8統(tǒng)計分析