外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結(jié)果顯...
密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣,用的較少。原理是:像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml,將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,隨后通過離心將外泌體分離。此法獲得的外泌體純度較高,但步...
細(xì)胞外基質(zhì):蛋白聚糖(proteoglycan),它們能夠形成水性的膠狀物,在這種膠狀物中包埋有許多其它的基質(zhì)成分;②結(jié)構(gòu)蛋白,如膠原和彈性蛋白,它們賦予細(xì)胞外基質(zhì)一定的強(qiáng)度和韌性;③粘著蛋白(adhesive,又稱纖維連接蛋白、纖粘蛋白,目前我國對該蛋白研究...
細(xì)胞外基質(zhì)的主要類型及功能:對人類細(xì)胞的研究表明,細(xì)胞外基質(zhì)中的纖粘蛋白主要由成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌并附著在細(xì)胞表面,其作用是促進(jìn)細(xì)胞對基質(zhì)的貼附,細(xì)胞之間的粘著,細(xì)胞內(nèi)微絲及應(yīng)力纖維的構(gòu)建。觀察到轉(zhuǎn)化的體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞,表面纖維蛋白量減少,與此相關(guān)地...
細(xì)胞外基質(zhì)已被發(fā)現(xiàn)可使組織再生和愈合。盡管細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)組織結(jié)構(gòu)重塑的作用機(jī)制仍不清楚,但研究人員現(xiàn)在認(rèn)為基質(zhì)結(jié)合納米囊泡(MBVs)是愈合過程中的關(guān)鍵因素。例如,在人類胎兒中,細(xì)胞外基質(zhì)與干細(xì)胞一起生長并再生人體的所有部分,胎兒可以在子宮中再生任何受損的部分...
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):1、細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15m培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。2、復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃...
無血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢:簡單、方便、快捷。1.即用型,無需現(xiàn)配,可直接使用。2.可孔板原位凍存,可微量凍存,無需使用凍存管。3.無需程序降溫,可直接放置-80℃凍存,操作簡單。4.不含血清,較大減少細(xì)胞污染。5.因不含血清,批次間差異小。6.無需...
細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和骨骼?。寒?dāng)肌肉組織受傷時(shí),肌肉自然震顫功能受阻,淋巴管和血管無法把細(xì)胞外基質(zhì)中玻尿酸產(chǎn)生的酸性物質(zhì)帶走,引發(fā)代謝受阻的同時(shí),細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的PH值也會隨著酸堿失衡的環(huán)境逐漸變低,直接影響細(xì)胞產(chǎn)生ATP。隨著代謝受阻及細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)環(huán)境的變化,...
細(xì)胞外基質(zhì)和系統(tǒng)之間的這種相互作用在再生物種中是如何工作的尚不清楚。刺胞動物系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)因子是蛋白酶、絲氨酸蛋白酶克制劑、克菌蛋白和補(bǔ)體系統(tǒng)。的原始機(jī)制是克菌肽(AMPs),在水螅體再生過程中,一些被歸類為AMPs的基因被上調(diào)。細(xì)胞外基質(zhì)不光靜態(tài)的發(fā)揮支持、...
對于很多科研汪來說,細(xì)胞是脆弱又重要的寶貝之一,承擔(dān)著重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)希望。尤其是在凍存復(fù)蘇的時(shí)候,經(jīng)常會因?yàn)橐恍┬〖?xì)節(jié)導(dǎo)致問題。比如:沒有控制好細(xì)胞的生長密度細(xì)胞的密度對細(xì)胞的生存質(zhì)量有著重要的影響,畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨(dú)的嬌貴寶寶。密度過高會讓...
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取...
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜...
外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,壓制機(jī)體的抗一些病癥免疫反應(yīng);肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動TLR8,使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號通路活...
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研...
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生...
細(xì)胞外基質(zhì)成分居然能調(diào)節(jié)葡萄糖代謝過程:鑒于錨定非依賴性生長對部位發(fā)生的重要性,已經(jīng)描述了基質(zhì)附著的分類變化及其代謝影響。透明質(zhì)酸(HA,或透明質(zhì)酸),一種普遍存在的ECM成分,是一種巨型醇胺糖胺聚糖,通過與其質(zhì)膜(PM)受體,CD44和HA介導(dǎo)的運(yùn)動受體(H...
外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN**段等多種物質(zhì),存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體...
細(xì)胞粘附;許多細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的成分結(jié)合。細(xì)胞粘附有兩種方式:通過局部粘連,將細(xì)胞外基質(zhì)連接到細(xì)胞的肌動蛋白絲,和半橋粒,將細(xì)胞外基質(zhì)連接到中間絲如角蛋白上。這種細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)的粘附由稱為整合素的特定細(xì)胞表面細(xì)胞粘附分子調(diào)節(jié)。整合素是細(xì)胞表面的蛋白質(zhì),它將細(xì)...
一個(gè)蛋白質(zhì)分子上可以連接1至100個(gè)以上GAG鏈。與一個(gè)*蛋白質(zhì)分子相連的GAG鏈可以是同種或不同種的。正規(guī)細(xì)胞外基質(zhì)膠價(jià)格角膜的細(xì)胞外基質(zhì)為透明柔軟的片層,肌腱的則堅(jiān)韌如繩索。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白聚糖(proteoglycan):蛋白聚糖是氨基聚糖(除透明質(zhì)酸外)...
無血清快速細(xì)胞凍存液,是一種新型的快速凍存細(xì)胞的保護(hù)液,可將細(xì)胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內(nèi)含天然抗凍蛋白(Naturalantifrereprotein),不含動物來源的血清成分,能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,減少各類病毒、霉菌和支原體等...
細(xì)胞外基質(zhì)與醫(yī)學(xué):目前學(xué)者們一致認(rèn)為惡性部位的侵蝕、轉(zhuǎn)移是一個(gè)動態(tài)的、連續(xù)的過程。部位細(xì)胞首先從原發(fā)部位脫落,侵入到細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularma-tric,ECM),與基底膜(basementmembrane,BM)與細(xì)胞間質(zhì)中一些分子粘附,并啟...
具膜囊泡,當(dāng)我們使用常規(guī)方法分離這些結(jié)構(gòu)時(shí)不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。外泌體(exosome)適用于通過特殊手段拿到的由胞內(nèi)體來源的釋放到細(xì)胞外的膜泡結(jié)構(gòu)。建議對細(xì)胞外囊泡進(jìn)行細(xì)分時(shí)使用物理上的界定如小細(xì)胞外囊泡(sEV)和中/大細(xì)胞外囊泡(m/lEV),...
細(xì)胞外基質(zhì)的主要類型及功能:a.骨的胞外基質(zhì)表現(xiàn)為剛硬的特點(diǎn),以滿足支撐的作用b.軟骨是另一種結(jié)締組織,其胞外基質(zhì)具有一定的韌性c.眼角膜中胞外基質(zhì)是透明的保護(hù)層。如前所述,動物組織的構(gòu)建既是多細(xì)胞相互作用的結(jié)果,也是細(xì)胞與胞外基質(zhì)相互作用和接觸的結(jié)果。胞外基...
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操...
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及...
無血清快速細(xì)胞凍存液,是一種新型的快速凍存細(xì)胞的保護(hù)液,可將細(xì)胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內(nèi)含天然抗凍蛋白(Naturalantifrereprotein),不含動物來源的血清成分,能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,減少各類病毒、霉菌和支原體等...
密度過高會讓細(xì)胞沒有足夠的生存空間,密度過低會讓細(xì)胞無法互相連接健康生長。建議大家在細(xì)胞接種前,一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長的濃度,提高細(xì)胞的存活率。溫度控制不達(dá)標(biāo)慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中,都會要求嚴(yán)格的梯度降溫,常見的是-4℃→-20...
細(xì)胞外基質(zhì)生理學(xué)功能:剛度和彈性:從柔軟的腦組織到堅(jiān)硬的骨組織,細(xì)胞外基質(zhì)可以以不同程度的剛度和彈性存在。細(xì)胞外基質(zhì)的彈性可以相差幾個(gè)數(shù)量級。這一特性主要取決于膠原蛋白和彈性蛋白的濃度,較近已證明細(xì)胞外基質(zhì)的剛度和彈性這個(gè)特性在調(diào)節(jié)許多細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用...
有的外泌體分離方法需要高速離心,需要使用大型機(jī)器,耗費(fèi)近24小時(shí)的時(shí)間才能獲得,非常不便。而高離心力也可能破壞囊泡。降低樣品的質(zhì)量。這項(xiàng)研究有望解決這一難題。在論文中,研究人員們提供了一種通過微流體和聲學(xué)的獨(dú)特組合從體液樣品中捕獲外泌體的新穎方法。他們開發(fā)的原...
無血清細(xì)胞凍存液:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的重要技術(shù),細(xì)胞凍存是細(xì)胞長期保存的重要手段。細(xì)胞凍存液,作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液,其作用是將需要凍存的細(xì)胞懸浮于凍存液,供給細(xì)胞生命代謝所必須的營養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)可以防止或減少冷凍冰晶對細(xì)胞的損傷作用。在現(xiàn)...