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    免疫組化結果背景染色較深的原因有哪些? (1)抗體濃度過高:一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試,使每一抗體個體化,找到適合自己實驗室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應如此,不能只簡單的按說明書進行染色。 (2)抗體孵育時間過長或溫度較高:解決辦法是,嚴格執(zhí)行操作規(guī)程,比較好隨身佩帶報時表或報時鐘,及時提醒,避免因遺忘而造成時間延長?,F(xiàn)在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時間不是傳統(tǒng)的1小時,而是30分鐘,因此,要根據(jù)染色結果進行調(diào)整。 (3)DAB變質(zhì)和顯色時間太長:DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配,如有沉...

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    免疫組化實驗流程介紹: 英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟: 1、SP三步法 1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。 2)0.3%或3%H2O2去離子水(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。 3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘 4)候選步驟:采用抗原修復:微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次. 5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來源一致。傾去,勿洗。 6)滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時或4℃過夜(比較好復溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。 7)滴加生物素標記的...

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