|
方法
|
靈敏度
|
優(yōu)勢
|
劣勢
|
|
培養(yǎng)法
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 便宜
ü 金標準
|
ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
|
|
DNA染色
(DAPI or Hoescht)
|
☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
|
|
間接染色
|
☆☆☆
|
ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
|
ü 費時
ü 需要細胞系指示
|
|
ELISA
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 客觀，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
|
ü 受抗體限制
ü 價格高
|
|
免疫染色
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
|
ü 可檢測的支原體種屬有限
|
|
放射自顯影
|
☆☆
|
ü 迅速
|
ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
|
|
生物發(fā)光
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
|
|
PCR
|
☆☆☆
|
ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
|
|
Real-Time PCR
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
|
|
LAMP
|
☆☆
|
ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
|
ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
細胞培養(yǎng)中支原體污染的后果？蘇州細胞培養(yǎng)支原體預防價格
|
細胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起：
1. 擴增產(chǎn)物污染：PCR擴增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導致假陽性結(jié)果。
2. 引物設計不當：引物設計不夠特異性，可能會與非目標序列發(fā)生反應，導致非特異性擴增。
3. 試劑質(zhì)量問題：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳，可能引起非特異性擴增或假陽性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問題：實驗操作不規(guī)范，如混合樣本、標簽錯誤或樣本標識不清等，可能導致假陽性結(jié)果。
5. PCR反應條件設置不當：不恰當?shù)腜CR反應條件，如溫度和時間選擇不當，可能導致非特異性擴增。
6. DNA污染：PCR環(huán)境中的DNA污染會干擾結(jié)果，導致假陽性
細胞培養(yǎng)支原體檢測試劑價格支原體及污染方式有哪些？
qPCR法，即定量聚合酶鏈式反應（QuantitativePolymeraseChainReaction）法，在支原體檢測中的應用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 快速定性檢測：qPCR法可以快速檢測生產(chǎn)原料、細胞庫、病毒種子、病毒或細胞收獲液、治*用細胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測：qPCR法可用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體，具有快速、特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
3. 監(jiān)管要求：基于TaqMan的qPCR測定專門針對檢測細胞治*和復雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā)，其性能滿足或超出監(jiān)管要求，如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制：qPCR法提供早期檢測支原體污染的方法，適用于藥物質(zhì)量控制，具有快速、高度特異性、靈敏性，并符合國際準則。
LAMP法，即環(huán)介導等溫擴增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原體檢測中的應用具有以下特點和應用場景：
1. 日常監(jiān)測：由于LAMP法的快速和簡便性，它適用于生物實驗室的日常監(jiān)測，可以及時檢測出支原體的存在，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
2. 疾病診斷：LAMP法已被成功應用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中，并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。
3. 臨床應用：LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性，可以用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體。
4. 多病原體檢測：LAMP法可以同時檢測多種病原體，包括肺炎支原體在內(nèi)的多種下呼吸道感*的病原體，為臨床診療提供詢證依據(jù)。
5. 與其他技術(shù)結(jié)合：LAMP法可以與CRISPR-Cas12a等其他技術(shù)結(jié)合，建立新的檢測方法，提高檢測的效率和準確性。
支原體檢測實驗的方法？
支原體是一類細菌，由于缺乏細胞壁，具有靈活的膜結(jié)構(gòu)。這使得支原體的形態(tài)多變，很難在高倍顯微鏡下識別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水，對許多針對細胞壁合成的常見抗*素具有抗性。它們的體積非常小，直徑通常在0.15~0.3μm，因此能夠輕易地穿過過濾系統(tǒng)。支原體能在哺乳動物細胞培養(yǎng)中可以高濃度生長，而不引起明顯的混濁或其他可見的污染跡象。
支原體通過特殊的前端細胞器與宿主細胞結(jié)合。支原體前端細胞器富含粘附素，可以附著在真核細胞上并穿透宿主細胞。支原體缺乏剛性細胞壁，可能有助于其與宿主細胞膜融合，并交換其膜和細胞質(zhì)成分。支原體的對細胞的毒性包括支原體侵襲性、分泌的致病酶和一些膜成分等都能夠有效地侵犯宿主。
支原體的檢測方法有哪些？細胞培養(yǎng)支原體檢測試劑價格
細胞被支原體污染了會有什么影響？蘇州細胞培養(yǎng)支原體預防價格
細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)的表達和分泌。
5. 實驗結(jié)果不準確：支原體污染會干擾實驗結(jié)果的準確性，導致實驗數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實驗的重復性。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實驗，如轉(zhuǎn)染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗。
蘇州細胞培養(yǎng)支原體預防價格