支原體污染和黑膠蟲(chóng)污染是兩種不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲(chóng)污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。
污染的影響：
支原體污染：可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲(chóng)污染：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有什么影響，但當(dāng)數(shù)量多時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。
污染的來(lái)源：
支原體污染：可能來(lái)源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染以及用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲(chóng)污染：可能來(lái)源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染，也可能通過(guò)培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。
為什么要去除支原體？蘇州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑
支原體去除試劑使用后，對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過(guò)特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來(lái)殺死支原體，而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過(guò)程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽(yáng)性結(jié)果。因此，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè)，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
蘇州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有什么影響？
目前有 210 +種不同種類(lèi)的支原體分布于人類(lèi)、動(dòng)物、昆蟲(chóng)和植物中，其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來(lái)源多種多樣，主要來(lái)源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來(lái)源的胰蛋白酶溶液。此外，來(lái)自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑；非無(wú)菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液；實(shí)驗(yàn)室人員；培養(yǎng)箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過(guò)度使用；細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種，以下是一些常用的檢測(cè)手段：
1. 顯微鏡檢測(cè)：通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞，支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周?chē)蚋接诩?xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn)。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡(jiǎn)便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增，是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法：基于LAMP技術(shù)，室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染。
支原體去除和支原體預(yù)防有什么區(qū)別？
在科研中，支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見(jiàn)的支原體檢測(cè)方法：
1. 支原體培養(yǎng)法：這是一種傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，通過(guò)將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中，觀察是否有支原體生長(zhǎng)。這是直接的檢測(cè)方法，但耗時(shí)較長(zhǎng)，通常需要數(shù)周時(shí)間。
2. DNA染色法：使用熒光染料（如Hoechst或DAPI）染色細(xì)胞核，然后通過(guò)熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡(jiǎn)便，可以快速得到結(jié)果，但特異性不高，可能會(huì)有假陽(yáng)性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法：這是一種分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性的引物，擴(kuò)增支原體DNA，從而檢測(cè)支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性，已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法。
4. 核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）：NAT技術(shù)通過(guò)擴(kuò)增并檢測(cè)特定的支原體基因組保守序列來(lái)進(jìn)行支原體污染檢測(cè)，具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體預(yù)防措施。南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除價(jià)格
支原體去除之后對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有無(wú)影響？蘇州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑
支原體去除的原理通常涉及以下幾個(gè)方面：
1. 抗*素作用：使用特定的抗*素制劑來(lái)抑制支原體的生長(zhǎng)和繁殖。例如，含有喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素衍生物類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗*素的混合制劑，這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細(xì)胞膜：支原體去除劑中的抑菌肽（AMPs）成分通過(guò)破壞支原體細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。
3. 抑制DNA復(fù)制：支原體去除劑通過(guò)抑制支原體DNA回旋酶活性，有效抑制支原體DNA的復(fù)制，從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。
4. 協(xié)同作用：某些支原體去除劑利用抑菌肽（AMPs）和穿膜肽（CPPs）的協(xié)同作用來(lái)除去支原體，穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細(xì)胞膜，增強(qiáng)其殺滅支原體的能力。
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