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來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-09-17

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病外泌體提?。旱退匐x心去除細(xì)胞和凋亡碎片。石家莊外泌體提取試劑直銷廠家

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功能:當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。石家莊外泌體提取試劑直銷廠家同時(shí)對(duì)超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本。

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外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時(shí)。

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研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。較后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測(cè)一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

通過過濾膜對(duì)上述體液樣本進(jìn)行過濾,進(jìn)一步去除體液中的細(xì)胞殘片及其他雜質(zhì)。石家莊外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體可通過流式、WB(檢測(cè)指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測(cè),普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。石家莊外泌體提取試劑直銷廠家

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