Trizol是一種總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞，壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清液中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時分離出細(xì)胞染色體DNA。這種情況下，可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解。貴陽RNA提取試劑廠家

RNA提取試劑注意事項：1、需自備氯仿，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。2、所有離心管，泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因為在細(xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA，推薦先加入適量TRIReagent，并裂解樣品后凍存。北京RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨較佳方法是保證樣品完全裂解，但相同的裂解方案換了一個樣本可能就沒轍了。

植物RNA提取：植物組織中，富含酚類化合物，或富含多糖，或含有某些尚無法確定的次級代謝產(chǎn)物，或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀，很難將其去除。所以我們在提取植物組織時，要選取針對植物的試劑盒，試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨，研磨過程中液氮要及時補(bǔ)充，避免樣品融化，研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻，避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本，則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量，否則組織研磨及裂解不徹底，會使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實、西瓜果實、桃子果實等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量（可選100~200mg）。4、植物組織，如植物葉片、根莖、堅硬的果實等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份，再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對植物組織的勻漿效果可能不佳，一般不建議使用。

RNA提取試劑盒原理：該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速，簡單，經(jīng)濟(jì)有效的方法，可從全血，哺乳動物細(xì)胞，細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞中分離總RNA。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上，同時使污染物通過柱被有效地洗去。純的RNA用RE緩沖液洗脫，不用酚提取或醇沉淀。RNA提取試劑盒特點：1、快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA。2、即用型RNA，可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用，例如RT-PCR，cDNA合成，NorthernBlotting，Differentialdisplay，PrimerExtension，mRNAselection。3、適用樣品：全血，哺乳動物細(xì)胞，細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞（樣品起始量：300μl全血，10^7個哺乳動物細(xì)胞，10^9個細(xì)菌細(xì)胞和10^8個菌類細(xì)胞。總共可以使用該試劑盒進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)提取。總RNA的產(chǎn)量可達(dá)30μg。產(chǎn)量可能因樣品類型而異。）mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板。

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞，壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。根據(jù)它們在不同的PH值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開。南京RNA提取試劑價格

以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等，可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。貴陽RNA提取試劑廠家

與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中，轉(zhuǎn)運RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合，而后核糖體RNA將各個氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。有些生物，例如一些病菌，也直接使用RNA作為遺傳信息的載體，而不是DNA。貴陽RNA提取試劑廠家