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石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

來源: 發(fā)布時間:2021-12-13

鼠尾膠原實驗應(yīng)用:鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果:自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性,免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹,鼠尾膠原

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立:探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法:原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果:形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論:①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ);②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。長沙正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體。

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鼠尾膠原類似物的建立:目的:探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法:原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果:形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論:①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ);②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟: 1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調(diào)節(jié)pH = 6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀; 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,調(diào)節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽處理;3.將脫鹽后的膠原蛋白溶液,-40至-20°C預(yù)凍2?4小時,然后真空冷凍干燥,凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,滅菌、包裝,得到成品膠原蛋白粉末。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。

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鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1M NaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6)使用時,無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

要準(zhǔn)備的器具:組織剪2把,有齒鑷1把,無齒鑷1把,200 ml燒杯1個,培養(yǎng)皿1個,帶蓋廣口瓶1個,離心管、小瓶數(shù)個,滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1%醋酸溶液。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,洗凈,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,用止血鉗夾住尾巴較高,折斷尾骨后拉出尾腱,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,稱尾腱的重量,按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置48 小時,離心。吸取其上清,分裝至小瓶,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

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