摘要: 本發(fā)明提供了一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法。將表面偶聯(lián)有親和配基的磁性微球加入到納豆激酶的發(fā)酵液中，在室溫下緩慢攪拌充分混合，使納豆激酶特異性地吸附在磁性微球表面；采用磁鐵將吸附有納豆激酶的磁性微球從發(fā)酵液中分離出來，用緩沖溶液清洗一次去除雜質，再用解析液進行解析，收集到納豆激酶的洗脫液；***經過冷凍干燥得到納豆激酶產品。分離后納豆激酶的活力為８５％，純化因子為６．０。本發(fā)明具有周期短、操作簡單、生產成本低且易于規(guī)模化生產等優(yōu)點。 利要求: 一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法，其特征在于，所述的納豆激酶分離純化方法包括以下幾個步驟：（１）納豆激酶發(fā)酵液的制備從固體培養(yǎng)基上挑取納豆激酶的單菌落接入２０－１００ｍＬ的種子培養(yǎng)基中，搖床中培養(yǎng)１２－２４ｈ，按２％－６％ 接種量接入發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，在２５－３７℃下發(fā)酵罐培養(yǎng)２４－４８ｈ，液體發(fā)酵結束后，通過離心除去菌體，得到納豆激酶發(fā)酵液；（２）親和配基在磁性微球上的固定化將自制的磁性高分子微球進行表面功能化修飾得到表面含有環(huán)氧功能基團的磁 性微球，在５０－８０℃條件下，以氫氧化鈉為催化劑，進行親和配基的固定化反應，獲得表面含有親和長沙分離純化微球

如何精確控制和大規(guī)?；a裸眼看不到的納米微球并賦予這些材料的功能， 以滿足現(xiàn)代產業(yè)的需求是當今納米材料科學家**重要的研究方向。納米微球 的關鍵技術問題和研究方向如下： 1） 納米微球粒徑大小徑及粒徑分布精確控制關鍵技術: 納米微球的應用非常***,不同的應用需要不同性能的微球,很多**應用都 對微球的粒徑大小和均一性都有極高的要求，如液晶間隔物微球和導電金 球都要求能精確控制粒徑大小（平均粒徑精度控制在50納米以下），粒徑分 布滿足變異系數(shù)小于3%,. 因此不同材料組成的納米微球的精確粒徑大小和分 布本領域首要解決的關鍵技術問題 2） 納米微球的孔徑大小,孔徑分布和比表面精確調控關鍵技術: 在很多應用領域，不僅要嚴格控制微球材料、粒徑大小、分布和機械強度， 還要調控微球的比表面積、孔道結構等,如用于生物分離和分析的微球介質和 色譜填料，微球粒徑大小、均一性、納米孔道結構都會影響生物分子分離和 分析效果，因此如何調控微球孔道結構，比表面積也是關鍵技術之一。長沙分離純化微球

2.3.2懸浮聚合
懸浮聚合法是單體小液滴懸浮在水中的聚合方法，在磁性粒子、穩(wěn)定劑和表面活性劑存在下、靠油溶性引發(fā)劑的作用使一種或幾種單體在磁性粒子表面聚合可將磁性粒子包裹在聚合物中。與乳液聚合相比，懸浮聚合單體液滴粒徑通常是微米級別的。Li等[17]合成一種新型的核殼式P(DVB-MAA)/Fe3O4納米復合微球，可作為分散模式的磁介導微觀粒子的固相萃取吸附劑。Fe3O4納米粒子通過溶劑熱法制備，P(DVB-MAA)通過懸浮聚合合成，微球的平均粒徑在300~700nm，微球殼層的P(DVB-MAA)厚度在10nm左右。該微球可用于水中微量的有機污染物的快速、高靈敏檢測。
2.3分散聚合
分散聚合是懸浮聚合的一種，也是一種特殊的沉淀聚合，反應之前單體、溶劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等是均一的混合體系，當反應開始，聚合物達到一定分子量之后，聚合物逐漸從反應體系中沉淀出來。Zhang等合成了Fe3O4含量高達70wt%、且分布比較均一的P(St–GMA)/Fe3O4的納米復合微球。由于只有當磁性粒子在反應初期成核過程中捕獲，并聚合增長才能得到復合微球，因此此方法的磁含量往往不高，且該法需使用的溶劑多為有機溶劑，聚合物與有機溶劑的親和性導致聚合物沉淀出時鏈長較長，粒徑較大，限制了其應用。

熒光微球分析技術屬于化學材料發(fā)展結果，可用于細胞表面抗原的檢測、退行性神經病變示蹤物、吞噬功能的檢測、血流分析、敏感性診斷試劑等，本文介紹了熒光微球分析技術以及熒光微球吞噬實驗的操作步驟。 熒光微球分析 技術簡介 熒光微球分析技術是近年來化學材料科學活躍發(fā)展 的產物，各種大小(0.2～10μm)可產生熒光和色彩的人工微球應運而生，目前各種材料人工合成、多種顏色和規(guī)格的熒光微球有2大類，一種是表面不帶修飾基團的微球，另一種是攜帶各種化學修飾基團，包括羧基化修飾、氨基修飾、巰基或醛巰基修飾等的微球。

磁性高分子微球是近年發(fā)展起來的一種新型磁性材料，是通過適當方法將磁性無機粒子與有機高分子結合形成的具有一定磁性及特殊結構的復合微球。磁性復合微球不僅具有普通高分子微球的眾多特性還具有磁響應性，所以不僅能夠通過共聚及表面改性等方法賦予其表面功能基 (如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,等)，還能在外加磁場作用下具有導向功能。 結合方式 ①與高分子先結合成微球，磁粉再吸附其表面； ②磁粉和高分子先結合成微球再吸附； ③磁粉、、高分子一起混合經均勻化后再微球化． Devineni等人合成 magnetic microsphers methotrexate (MM-MTX) 載體用以**，MTA通過2—二甲胺甲基—1—乙基鏈接在磁性粒子的表面，通過水解可以釋放．但是實驗發(fā)現(xiàn)在45min內又重新分配，導致小鼠的死亡．此類問題有待進一步研究解決．專業(yè)分離純化微球

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2.3單體法
單體聚合法是目前研究**多、被***采用的制備方法。單體聚合法是在有機單體和磁性粒子共同存在的情況下，根據(jù)不同的聚合方式加入表面活性劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等聚合制備磁性高分子微球的方法。常用的方法主要包括乳液聚合、（微）懸浮聚合、分散聚合以及活性聚合等。其中乳液聚合又分為無皂乳液聚合、Pickering乳液聚合法、種子乳液聚合、細乳液聚合法、反相乳液聚合、原位乳液聚合等。
2.3.1乳液聚合
無皂乳液聚合是指在反應過程中完全不加乳化劑或者**加入微量乳化劑(其濃度小于臨界膠束濃度(CMC))的乳液聚合過程Wu采用將通過油酸改性后的Fe3O4納米粒子與溫敏性N-異丙基丙稀醜胺在交聯(lián)劑DVB作用下，通過無培乳液聚合方法制備了具有磁場和溫度雙重相應的復合微球，該復合微球具有核殼結構，尺寸約為100nm，其比較低臨界溶解溫度(LCST)在40-45℃。Yamauchi等利用無皂乳液聚合法制備出平均粒徑達到515nm、比飽和磁化強度達到7.3A·m2/kg的磁性高分子復合微球。
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