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其實(shí)電子顯微鏡相比于光學(xué)顯微鏡的重要優(yōu)勢(shì)或者存在的比較大意義,準(zhǔn)確的來(lái)說(shuō),不在于放大倍數(shù),而在于超高的分辨率。這兩者是不同的。通俗的來(lái)說(shuō),就是進(jìn)行觀察的時(shí)候,除了要將物體放大,還需要能將它與相鄰的其他物體分辨開(kāi)來(lái)。如果兩個(gè)相鄰微粒的圖像在光學(xué)顯微鏡下,即使放大到很大,看到的可能卻是兩個(gè)相交的亮斑(艾里斑),而沒(méi)有明顯的界限(更不用說(shuō)細(xì)節(jié)了),這表示是分辨率不夠。拋開(kāi)分辨率談放大倍數(shù)是沒(méi)有意義的。光學(xué)顯微鏡的分辨率極限是阿貝極限,約等于光波波長(zhǎng)的一半,通常被說(shuō)成是光學(xué)顯微鏡放大極限,其實(shí)準(zhǔn)確地來(lái)說(shuō),應(yīng)該叫做分辨率的極限。而其產(chǎn)生的原因是光的衍射,根本原因是光的波粒二象性。電子衍射實(shí)驗(yàn)證明了電子的波動(dòng)性,于是用電子代替光的電子顯微鏡成為可能。電子顯微鏡也有多種,題主說(shuō)的是像REM的。電鏡也存在用衍射規(guī)則觀察的,比如低能電子衍射(LEED)和透射電鏡(TEM)。兩者主要用于觀察晶體,根據(jù)其周期性的特點(diǎn)而生成倒易空間里的衍射圖像,借助elward球或者傅里葉變換就可以轉(zhuǎn)換到實(shí)空間,得到真正的晶體表面圖像了。如果已經(jīng)有了飛秒光,就可以幾套雙光子顯微鏡共享一臺(tái),只需分光即可。國(guó)內(nèi)ultima2PPLUS雙光子顯微鏡用途
新一代微型化雙光子熒光顯微鏡體積小,重只2.2克,適于佩戴在小動(dòng)物頭部顱窗上,實(shí)時(shí)記錄數(shù)十個(gè)神經(jīng)元、上千個(gè)神經(jīng)突觸的動(dòng)態(tài)信號(hào)。在大型動(dòng)物上,還可望實(shí)現(xiàn)多探頭佩戴、多顱窗不同腦區(qū)的長(zhǎng)時(shí)程觀測(cè)。相比單光子激發(fā),雙光子激發(fā)具有良好的光學(xué)斷層、更深的生物組織穿透等優(yōu)勢(shì),其橫向分辨率達(dá)到0.65μm,成像質(zhì)量與商品化大型臺(tái)式雙光子熒光顯微鏡可相媲美,遠(yuǎn)優(yōu)于目前領(lǐng)域內(nèi)主導(dǎo)的、美國(guó)腦科學(xué)計(jì)劃重要團(tuán)隊(duì)所研發(fā)的微型化寬場(chǎng)顯微鏡。采用雙軸對(duì)稱(chēng)高速微機(jī)電系統(tǒng)轉(zhuǎn)鏡掃描技術(shù),成像幀頻已達(dá)40Hz(256*256像素),同時(shí)具備多區(qū)域隨機(jī)掃描和每秒1萬(wàn)線的線掃描能力。此外,采用自主設(shè)計(jì)可傳導(dǎo)920nm飛秒激光的光子晶體光纖,該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了微型雙光子顯微鏡對(duì)腦科學(xué)領(lǐng)域較廣泛應(yīng)用的指示神經(jīng)元活動(dòng)的熒光探針(如GCaMP6)的有效利用。同時(shí)采用柔性光纖束進(jìn)行熒光信號(hào)的接收,解決了動(dòng)物的活動(dòng)和行為由于熒光傳輸光纜拖拽而受到干擾的難題。未來(lái),與光遺傳學(xué)技術(shù)的結(jié)合,可望在結(jié)構(gòu)與功能成像的同時(shí),精細(xì)地操控神經(jīng)元和神經(jīng)回路的活動(dòng)。進(jìn)口布魯克雙光子顯微鏡授權(quán)商微型雙光子顯微鏡的優(yōu)勢(shì)是。
雙光子熒光顯微鏡是結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新技術(shù)。雙光子激發(fā)的基本原理是:在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子,在經(jīng)過(guò)一個(gè)很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時(shí)間后,發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子;其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙(多)光子成像優(yōu)勢(shì)在于,具有更深的組織穿透深度,利用紅外光,能夠在層面檢測(cè)極限達(dá)1mm的組織區(qū)域;因信號(hào)背景比高,而具有更高的對(duì)比度;因激發(fā)體積小,具有定點(diǎn)激發(fā)的特性,具有更少的光毒性;激發(fā)波長(zhǎng)由紫外、可見(jiàn)光調(diào)整為紅外激發(fā),使其能夠更加安全。
雙光子技術(shù)在醫(yī)療診斷應(yīng)用中具有巨大的潛力,需要系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)研究與龐大的醫(yī)療數(shù)據(jù)加以支撐,通過(guò)研究人體基于多光子成像技術(shù),進(jìn)行細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生化成分、微環(huán)境、組織形態(tài)、代謝功能的影響信息,找到與疾病的細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、組織病理學(xué)、診斷和特征的關(guān)聯(lián)關(guān)系,共同探究生理病理基礎(chǔ)和分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制,篩選鑒定、皮膚病、自身免疫病及其他疑難疾病的診斷及鑒別診斷依據(jù),建立全新的多光子細(xì)胞診斷的完整數(shù)據(jù)庫(kù),定義出針對(duì)不同疾病的多光子臨床檢測(cè)設(shè)備的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)。討論環(huán)節(jié),來(lái)自病理科、呼吸中心、心臟科、神經(jīng)科、皮膚科及研究所的多位醫(yī)師及研究人員紛紛結(jié)合各自的工作領(lǐng)域與王愛(ài)民副教授展開(kāi)了熱烈的討論,其中毛發(fā)中心楊頂權(quán)主任計(jì)劃再次邀請(qǐng)王愛(ài)民副教授進(jìn)行學(xué)術(shù)交流。雙光子顯微鏡能夠在細(xì)胞甚至是亞細(xì)胞水平上對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、離子濃度、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、進(jìn)行直接成像監(jiān)測(cè)。
隨著技術(shù)的發(fā)展,雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,結(jié)合它的特點(diǎn),大致可以分成深和活兩個(gè)方面的提升。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面,大致可從兩個(gè)方面入手,裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造。關(guān)于裝置優(yōu)化,我們可以把激光束變得更細(xì),使能量更加集中,就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本,其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,解決這個(gè)問(wèn)題,我們需要對(duì)樣本進(jìn)行透明化處理。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,使其中的物質(zhì)(主要是脂質(zhì))被破壞或溶解。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解,讓標(biāo)本的“透明度”提高。雙光子顯微鏡的探測(cè)器,該怎么選用?國(guó)內(nèi)ultima2PPLUS雙光子顯微鏡用途
雙光子顯微鏡的原理是什么?國(guó)內(nèi)ultima2PPLUS雙光子顯微鏡用途
光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡本質(zhì)的區(qū)別在于,光學(xué)顯微鏡:用的是可見(jiàn)光電子顯微鏡:用的是高頻電子射波有什么區(qū)別,在于一個(gè)基本的原理,光的衍射。。。光波是一個(gè)有趣的東西,其中有一項(xiàng),如果物體的體積小于光的波長(zhǎng),光一般可以繞過(guò)去,不發(fā)生明顯變化。也就是說(shuō),有這個(gè)物體和沒(méi)這個(gè)物體,在這種情況下,光是不會(huì)發(fā)生明顯改變的??梢?jiàn)光的波長(zhǎng)(肉眼):380~780納米,也就是,如果比380納米還要小的東西,用光學(xué)顯微鏡,無(wú)論你放大多少倍,也是看不見(jiàn)的。因?yàn)楣饫@過(guò)去了。。。光的衍射為了克服這個(gè)問(wèn)題,科學(xué)家用波長(zhǎng)更短的光去照射物體,也是就被觀測(cè)物。比如10納米級(jí)的光,這樣,就能看到我們用肉眼無(wú)論如何都看不見(jiàn)的東西。這就是電子顯微鏡多說(shuō)一句,光速是不變的。光速=頻率×波長(zhǎng)。波長(zhǎng)越短,頻率越大。。頻率越大,光波的能量越大。這就是為什么電子顯微鏡的功率越大,能看到的東西越小。顏色取決于物體能反射光的波長(zhǎng)的長(zhǎng)短當(dāng)你看到的物體小于較小可見(jiàn)光的波長(zhǎng),那它就是沒(méi)有顏色的。。。因?yàn)轭伾侨庋蹖?duì)于可見(jiàn)光頻率在大腦中的投影。。。。所以只能把他們統(tǒng)一變?yōu)楹诎?。。。沒(méi)有顏色不是透明的意思,它們不是肉眼可見(jiàn)顏色的定義中包含的。國(guó)內(nèi)ultima2PPLUS雙光子顯微鏡用途