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品質(zhì)空間轉(zhuǎn)錄組使用

來源: 發(fā)布時間:2021-11-02

早期空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的另一條發(fā)展路線是基因捕獲和增強子捕獲篩選,開發(fā)于二十世紀(jì)八十年代,當(dāng)時 DNA 測序通量正在增加,動物基因組是新開放的前沿領(lǐng)域。果蠅和小鼠的篩選是在八十年代后期進行的,目的是觀察未靶向且通常未知的基因表達(dá)情況。隨著通量的增加,增強子和基因捕獲技術(shù)在九十年代成為空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的技術(shù),直到 WMISH 在九十年代后期興起。WMISH 技術(shù)的自動化程度較高,避免了對轉(zhuǎn)基因品系的依賴,同時由于在二十一世紀(jì)初獲得物種的參考基因組信息變得越來越便利,探針設(shè)計因此也更為方便。轉(zhuǎn)錄本的空間位置信息可以通過在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉(zhuǎn)錄本來獲取,?如空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。品質(zhì)空間轉(zhuǎn)錄組使用

基于原位測序的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)?;谠粶y序(ISS)的方法通過測序產(chǎn)生空間轉(zhuǎn)錄組信息,這種方法只依靠連接酶連接兩段DNA—一段已知序列的引物和一個探針與模板匹配,不匹配的探針就會被洗掉。2013年開發(fā)的ISS中,每個探針使用一個查詢堿基來測序基因條形碼。FISSEQ和后來的EXeq使用了SOLiD,每個探針使用兩個查詢堿基來測序環(huán)化和RCA擴增的cDNAs。在STARmap中,基因條形碼由SEDAL測序,其中還使用了兩個類似固體的查詢堿基來避免錯誤。BARseq還用基因條形碼放大了RCA探針?;贗SS技術(shù)的優(yōu)勢包括:單細(xì)胞分辨率、亞細(xì)胞轉(zhuǎn)錄物定位和可應(yīng)用于更大的組織區(qū)域。缺點是:檢測效率較低。海南歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析軟件開發(fā)語言統(tǒng)計情況。

空間轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測基因表達(dá)的一種技術(shù),與bulk RNA-seq或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序相比,空間轉(zhuǎn)錄組避免了組織中細(xì)胞位置信息的丟失,使得我們在檢測基因表達(dá)的同時獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。正是由于空間轉(zhuǎn)錄組可以從多維度解析生物學(xué)過程的特點,近年來關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組無論是在技術(shù)開發(fā),還是大規(guī)模應(yīng)用或商業(yè)化,都得到蓬勃發(fā)展。例如2019年4月,Science發(fā)文通過空間轉(zhuǎn)錄組揭示ALS(肌萎縮側(cè)索硬化癥,又稱漸凍癥)分子病理的時空動態(tài);2019年8月,Nature在線發(fā)表了景乃禾團隊解析小鼠早期胚胎細(xì)胞的時空表達(dá)數(shù)據(jù);2020年9月,Cell上發(fā)表了一篇利用空間轉(zhuǎn)錄組解析人鱗狀細(xì)胞*的文章;2021年1月,Science發(fā)表了將組織擴展和原位RNA測序結(jié)合起來的新型空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)ExSeq;2021年4月,10x Genomics公司宣布了新一代FFPE空間轉(zhuǎn)錄組商業(yè)化解決方案。

空間轉(zhuǎn)錄組的應(yīng)用有哪些?一、發(fā)現(xiàn)疾病的空間異質(zhì)性:同時了解患病組織中的細(xì)胞類型及其定位有助于解決空間分辨的轉(zhuǎn)錄組學(xué)問題。在不同的環(huán)境下,明智地選擇這些方法在生物學(xué)研究中也是至關(guān)重要的,例如在神經(jīng)科學(xué)中,基于FISH的方法很普遍;基于LCM的方法適用于小樣本(例如臨床樣本)以及整個轉(zhuǎn)錄組或基因組分析。二、構(gòu)建空間轉(zhuǎn)錄組圖譜:借助于空間分辨的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué),建立圖譜可能是在分子水平上研究生物體結(jié)構(gòu)的重要步驟。目前的多項研究通過單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組技術(shù)結(jié)合空間轉(zhuǎn)錄技術(shù),得到多個***的時空轉(zhuǎn)錄組圖譜(相關(guān)研究后續(xù)會在如下專輯更新)。了解空間轉(zhuǎn)錄組樣本準(zhǔn)備注意事項。

空間轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測基因表達(dá)的一種技術(shù),與bulk RNA-seq或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序相比,空間轉(zhuǎn)錄組避免了組織中細(xì)胞位置信息的丟失,使得我們在檢測基因表達(dá)的同時獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。已發(fā)表的關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。這些方法或是在細(xì)胞數(shù)量上限制較大,或是存在有效測序深度不足等問題。正是由于空間轉(zhuǎn)錄組可以從多維度解析生物學(xué)過程的特點,近年來關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組無論是在技術(shù)開發(fā),還是大規(guī)模應(yīng)用或商業(yè)化,都得到蓬勃發(fā)展。


空間轉(zhuǎn)錄組使得在mRNA樣品處理和后續(xù)測序過程中位置信息的編碼和獲取成為可能。福建運用空間轉(zhuǎn)錄組

該類工具的開發(fā)將簡化不同類型空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的整合和分析。品質(zhì)空間轉(zhuǎn)錄組使用

空間轉(zhuǎn)錄組研究的的必要性。研究單細(xì)胞我們想要探究細(xì)胞間的異質(zhì)性,但是常規(guī)的單細(xì)胞是將細(xì)胞解離成單細(xì)胞懸液,然后利用單細(xì)胞分離技術(shù)(微孔,微板,液滴)等方法實現(xiàn)單細(xì)胞建庫,這里比較大的問題是是細(xì)胞失去了原本在組織的空間信息。然而這個空間信息在實際研究中有很重要。特別是在研究細(xì)胞命運機制及細(xì)胞譜系發(fā)生空間位置的信息顯得尤為重要,因此發(fā)展空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)實現(xiàn)細(xì)胞的位置信息的保留,對研究此類細(xì)胞狀態(tài)尤為必要。品質(zhì)空間轉(zhuǎn)錄組使用

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