原代肝細胞是藥物早期研究的金標(biāo)準(zhǔn)細胞模型。藥物通過肝臟代謝后，大多數(shù)藥物的毒性被消除，但同時也有一些無毒或低毒的物質(zhì)通過生物轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)變成有毒甚至毒性更大的物質(zhì)，因此肝臟便必然成為研究藥物毒性的重要target organ。原代肝細胞即為一個較好的篩選模型，尤其是在檢測結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物時，原代肝細胞的角色更為重要。 人原代肝細胞是重要的體外模型。人原代肝細胞在較大程度上保留了細胞在體內(nèi)organ里的功能,各種物質(zhì)代謝功能和酶活性與體內(nèi)的肝細胞極其相似,是較為接近臨床的一種標(biāo)準(zhǔn)體外短期培養(yǎng)模型。人原代肝細胞通常從肝或肝組織中獲得,一般在肝切除手術(shù)中或者肝移植后排斥的肝組織中獲取,隨后即時進行研究或者凍存待用。 原代肝細胞是肝臟疾病的研究以及相應(yīng)藥物的開發(fā)的重要載體。比如一些對于乙肝病毒的研究需要對肝細胞進行體外培養(yǎng)；一些嚴重肝臟疾病的細胞移植研究也要涉及到對原代肝細胞進行大量擴增。因此，原代肝細胞的體外培養(yǎng)和研究是一直以來科學(xué)家們關(guān)注的熱點。貼壁原代肝細胞主要用于肝臟再生研究、肝臟3D打印、肝臟疾病研究、HBV、HCV病毒研究等。汕尾樹鼩原代肝細胞實驗
原代肝細胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團，胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長，生存空間大，允許長時間生長，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細胞相互接觸后可抑制細胞的運動，因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當(dāng)細胞數(shù)量達到一定密度后，由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細胞分裂停止，稱為密度抑制。 當(dāng)肝細胞被分離后，可以進行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在開始的4~6h內(nèi)細胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時間的延長而迅速下降，故懸浮肝細胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復(fù)過來，保持了正常肝細胞的生物學(xué)特征及代謝活性，一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。天津比格犬原代肝細胞純化立沃生物原代肝細胞配套有專業(yè)的技術(shù)團隊，對后續(xù)的細胞復(fù)蘇，培養(yǎng)，實驗開展提供有力的技術(shù)保障。
原代肝細胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細胞培養(yǎng)是一種常用的實驗方法，但在培養(yǎng)過程中，細胞可能會受到endotoxin的污染，這會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，可以引起炎癥反應(yīng)和細胞損傷。在原代肝細胞培養(yǎng)中，endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)器具或細胞本身。因此，需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽離子樹脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而減少其對細胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單，只需要將其加入培養(yǎng)基中，然后將細胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結(jié)果顯示endotoxin含量較高，可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外，還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如，使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染，保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
原代肝細胞的融合度是影響其生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)融合度達到70%以上時，細胞開始進入高度同步狀態(tài)，細胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮，從而促進了細胞的生長和增殖。但是，如果融合度低于70%，細胞之間的相互作用就會受到限制，導(dǎo)致細胞的增值能力受到限制，無法達到100%。 此外，細胞之間的距離也是影響細胞生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)細胞之間的距離剛好是黃金分割點時，細胞開始進入高度同步狀態(tài)，細胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮，從而促進了細胞的生長和增殖。但是，如果細胞之間的距離超過了黃金分割點，細胞就無法進入高度同步狀態(tài)，從而導(dǎo)致細胞的增值能力受到限制。 細胞的培養(yǎng)密度也是影響細胞生長和增值能力的重要因素之一。低密度培養(yǎng)雖然可以保持細胞的功能，但是細胞的增值能力會很快丟失。而高密度培養(yǎng)可以維持細胞的功能一段時間，但是也會導(dǎo)致細胞之間的相互作用受到限制，從而影響細胞的生長和增殖。因此，在進行原代肝細胞的培養(yǎng)時，需要根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)密度，以保證細胞的生長和增值能力得到正常的發(fā)揮。原代肝細胞是從新鮮的肝臟組織中分離出來的細胞。
原代肝細胞也被多方面應(yīng)用于嵌合體肝模型當(dāng)中。通過將正常人原代肝細胞移植到患有嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中，可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達能夠促使鼠肝細胞死亡，從而為人原代肝細胞的移植、重建和增殖提供了一個適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi)，人肝細胞占據(jù)了大約75％的比例，并且能夠持續(xù)高水平地表達人血清蛋白。通過使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測到病毒的RNA。然而，病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機制提供了新的途徑，并為開發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。此外，這項研究還為研究肝細胞移植和重建提供了新的實驗?zāi)Ｐ?。通過將人原代肝細胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中，研究人員可以更好地研究原代肝細胞的生長、分化和功能，從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項研究的結(jié)果具有重要的臨床意義，有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。原代肝細胞作為體外藥物代謝研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在藥物代謝和毒理學(xué)研究中具有重要的意義。佛山新西蘭兔原代肝細胞懸浮
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原代肝細胞是肝臟研究和藥物研發(fā)的“金標(biāo)準(zhǔn)”細胞模型。原代肝細胞是從機體內(nèi)分離出來的肝細胞，經(jīng)過立即培養(yǎng)或凍存處理后得到的細胞。這種細胞保留了肝細胞原始的生理功能和分化狀態(tài)，因此被廣泛應(yīng)用于肝臟研究和藥物研發(fā)領(lǐng)域。相比于其他肝細胞模型，原代肝細胞具有更高的可靠性和生物學(xué)真實性，能夠更準(zhǔn)確地反映肝臟的生理和病理狀態(tài)。除此之外，原代肝細胞還具有良好的可塑性和可重復(fù)性，可以通過不同的處理方法來模擬不同的肝臟疾病和藥物反應(yīng)，為藥物研發(fā)提供了重要的參考和依據(jù)。因此，原代肝細胞被認為是肝臟研究和藥物研發(fā)的“金標(biāo)準(zhǔn)”細胞模型，對于深入了解肝臟生理和病理機制，以及開發(fā)更安全有效的藥物具有重要的意義。汕尾樹鼩原代肝細胞實驗