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線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量

來源: 發(fā)布時間:2023-05-21

1、對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。

2、對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

3、即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。 用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因?線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物!

細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀是什么原因?

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瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物!Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動物源成分。聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

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瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司目前已成為一家集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售相結(jié)合的貿(mào)易型企業(yè)。公司成立于2019-02-15,自成立以來一直秉承自我研發(fā)與技術(shù)引進相結(jié)合的科技發(fā)展戰(zhàn)略。公司具有血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機等多種產(chǎn)品,根據(jù)客戶不同的需求,提供不同類型的產(chǎn)品。公司擁有一批熱情敬業(yè)、經(jīng)驗豐富的服務團隊,為客戶提供服務。PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote致力于開拓國內(nèi)市場,與醫(yī)藥健康行業(yè)內(nèi)企業(yè)建立長期穩(wěn)定的伙伴關(guān)系,公司以產(chǎn)品質(zhì)量及良好的售后服務,獲得客戶及業(yè)內(nèi)的一致好評。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司本著先做人,后做事,誠信為本的態(tài)度,立志于為客戶提供血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機行業(yè)解決方案,節(jié)省客戶成本。歡迎新老客戶來電咨詢。

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