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EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

來源: 發(fā)布時間:2021-09-01

細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液,室溫培養(yǎng)30分鐘,棄固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,搖床孵育5分鐘,以中和過量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細(xì)胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理,固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的特點(diǎn)是什么?上海東寰告訴您。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

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現(xiàn)在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測。EdU (5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團(tuán)在天然化合物中很少見,在細(xì)胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行高效快速的細(xì)胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準(zhǔn)確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細(xì)胞內(nèi)更容易擴(kuò)散,不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實(shí)情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。山東正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒使用時要考慮什么問題?

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細(xì)胞活性的細(xì)胞增殖檢測方法,能檢測到細(xì)胞的總體增殖效果,但無法檢測到單個的增殖細(xì)胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的,但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDA SE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細(xì)胞,但由于每增殖一次熒光減弱一半,在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞,檢測靈敏度不是很高,通常適用于流式細(xì)胞儀檢測。在進(jìn)行科學(xué)研究時,上述這些基于細(xì)胞活性或CFDA SE的方法可以作為EdU法的補(bǔ)充性檢測方法。

EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理,固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測,就可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的作用是什么?上海東寰告訴您。

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通過檢測EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測,可有效避免樣品損傷,在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。EdU法檢測試劑盒是Brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧啶)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。通過以上原理圖的對比,大家不難發(fā)現(xiàn),EdU法檢測細(xì)胞增殖,無須抗體,無變性步驟,保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性,是一種簡單,可靠,省事的創(chuàng)新方法。使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒前的安全檢查。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

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細(xì)胞增殖的能力是評價細(xì)胞、代謝、生理、病理狀況、細(xì)胞活性、基因毒性等的重要指標(biāo)之一,細(xì)胞增殖雖然與多種因素有關(guān),比如細(xì)胞代謝活性、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白表達(dá)、ATP的濃度等等,但是檢測細(xì)胞增殖現(xiàn)象的zui直接zui準(zhǔn)確的方法就是用熒光探針直接檢測遺傳物質(zhì)DNA的合成,這種方法是研究細(xì)胞增殖、信號通路、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法。目前,基于DNA的合成原理,人們zui初開發(fā)了工具是BrdU染色法,但是這種方法操作耗時長,往往需要過夜處理細(xì)胞,操作繁雜,比如需要DNA變性、抗原修復(fù)以及抗原抗體反應(yīng)等操作,后來在BrdU的基礎(chǔ)上,人們開發(fā)出了革命性的探針--EdU,這種方法不需要繁雜的操作,節(jié)約時間,且反應(yīng)更靈敏和準(zhǔn)確。并且與MTT/WST-1或者CCK-8這種依靠化學(xué)顯色法只能得到一個折線圖的方法相比,EdU細(xì)胞增殖檢測法可以得到高清細(xì)胞增殖現(xiàn)象數(shù)據(jù)圖,可視化展示數(shù)據(jù)、更直觀、更具視覺效果!EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

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