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江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒廠家

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-02-01

現(xiàn)在有一種新的檢測(cè)方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測(cè)。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團(tuán)在天然化合物中很少見,在細(xì)胞增殖時(shí)能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行高效快速的細(xì)胞增殖檢測(cè)分析,可以有效地檢測(cè)處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法相比,更簡(jiǎn)單,更快速,更準(zhǔn)確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細(xì)胞內(nèi)更容易擴(kuò)散,不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、的整體水平上觀測(cè)細(xì)胞增殖的真實(shí)情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測(cè)速度上海東寰EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的運(yùn)用領(lǐng)域。江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒廠家

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該方法無(wú)需DNA變性,無(wú)需抗原修復(fù),無(wú)需抗原抗體反應(yīng),簡(jiǎn)單、靈敏、快速、準(zhǔn)確,適合各種細(xì)胞系的細(xì)胞增殖檢測(cè),尤其適用于各種細(xì)胞系的高通量篩選實(shí)驗(yàn),如在藥物篩選中檢測(cè)加藥后細(xì)胞增殖變化。EdU方法無(wú)需DNA變性,完全適用于各種顯微成像技術(shù),在10X,20X,40X都能得到很好的成像效果。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性操作,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)。河北提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒價(jià)格EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)是什么?上海東寰告訴您。

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EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子中,通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性,適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。與BrdU檢測(cè)方法相比,EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無(wú)需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。

Jurkat細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時(shí)后染色,然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。從流式結(jié)果圖中可以看出,EdU標(biāo)記的細(xì)胞有較高比例的綠色熒光陽(yáng)性細(xì)胞,呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽(yáng)性(強(qiáng)染色)的兩個(gè)峰,分別對(duì)應(yīng)于未增殖細(xì)胞和增殖細(xì)胞。經(jīng)過Hydroxyurea處理的細(xì)胞,綠色熒光陽(yáng)性的細(xì)胞幾乎完全消失,剩下一個(gè)綠色熒光陰性的峰。Hela細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時(shí)后染色(步驟染Hoechst,方便觀察增殖細(xì)胞比例),然后通過熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。鏡下可見,*EdU標(biāo)記的細(xì)胞有一部分染上綠色熒光的增殖細(xì)胞,未增殖細(xì)胞的細(xì)胞核呈藍(lán)色單染。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的重要組成部分。

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    搖床孵育5分鐘,以中和過量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ulTritonX-100細(xì)胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細(xì)胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;染色反應(yīng)液組分500ul1ml2ml5mlIX反應(yīng)緩沖液430ul860ulmlml催化劑溶液20ul40ul80ul200ulTAMRA紅色熒光溶液ulul5ulul緩沖添加劑50ul100ul200ul500ul(d)每孔加入100ul配置好的檢測(cè)混合液,以覆蓋細(xì)胞為宜,避光、室溫孵育30分鐘。(e)棄染色反應(yīng)液,加入300ulTritonX-100細(xì)胞滲透液清洗2-3次,每次10分鐘;(f)棄細(xì)胞滲透液,用PBS洗兩次,每次5分鐘。DNA染色(a)將Hoechst33342用PBS溶液1:1000進(jìn)行稀釋得到終濃度為5ug/ml的lxHoechst染色液;(b)每孔加入300ul1xHoechst染色液,室溫避光孵育20-30分鐘后,棄染色液;(c)每孔加入300ulPBS洗細(xì)胞兩次,去掉洗液。江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒廠家

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