實(shí)驗(yàn)介紹細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)將Transwel小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,上下層培養(yǎng)液以聚磚酸甜膜相隔,將研究的細(xì)胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸脂膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)跑,應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過(guò)不同處理的聚碳酸脂膜,就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。一、實(shí)驗(yàn)步驟:材料準(zhǔn)備可拍照顯微鏡,Transwel小室,孔徑8um,沒(méi)包被膠的(Coste和Corning公司的也較常用),Transwel遷移實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板24孔板。細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買的Transwel小室相配套,BD公司的Matiael,無(wú)血清DMEM,(1%胎生血清)DMEM和1640培養(yǎng)基,DMEM完全培養(yǎng)基,1640完全培養(yǎng)基(也可加到20%血清),無(wú)菌PBS,棉簽,胰酶,甲醇,結(jié)晶紫染液((g/ml)PBS結(jié)晶案)。二、步驟和流程用BD公司的Matrioel1:8(根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生mmp的量來(lái)決定)釋,包被Transwel小室底部膜的上室面,置37C30min使Mtrigel聚合成凝膠。使用前進(jìn)行基底膜水化。1、制備細(xì)胞懸液前可先讓細(xì)胞撤血清饑餓12-24h,進(jìn)一步去除血清的影響,但這一步并不是必須的。2、消化細(xì)胞,終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基重縣,調(diào)整細(xì)胞密度至5x105/ml。該處細(xì)胞膜凹凸相嵌,并特殊分化形成橋粒,彼此緊密連接,但心肌細(xì)胞之間并無(wú)原生質(zhì)的連續(xù)。上海品質(zhì)好的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)哪家好
一、原理在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的區(qū)域劃線,去除部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,在顯微鏡下觀察并拍照記錄特定位置細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力。通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同,可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力的差別。二、步驟1、準(zhǔn)備:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺(tái)內(nèi))2、流程:1.培養(yǎng)板劃線:先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃?rùn)M線,大約每隔cm一道,橫穿過(guò)孔,每孔至少穿過(guò)5條線;2.鋪細(xì)胞:在孔中加入約5×105個(gè)細(xì)胞,具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過(guò)夜能鋪滿;3.細(xì)胞劃線:第二天用頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,頭要垂直,不能傾斜;4.洗細(xì)胞:用PBS洗細(xì)胞3次,去除劃下的細(xì)胞,加入無(wú)血清培養(yǎng)基;5.細(xì)胞培養(yǎng)及觀察:放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng);按0,6,12,24小時(shí)取樣,倒置顯微鏡觀察特定位置細(xì)胞遷移情況并拍照;6.結(jié)果分析:使用ImageJ軟件打開(kāi)圖片后,隨機(jī)劃取6-8條水平線,計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。三、注意事項(xiàng)1、鋪細(xì)胞使用6孔板,因?yàn)?孔板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕。安徽怎樣原代細(xì)胞分離培養(yǎng)評(píng)價(jià)提供的原代細(xì)胞均需經(jīng)過(guò)細(xì)胞類型特異性標(biāo)記物、細(xì)胞形態(tài)學(xué)以及微生物檢測(cè)等服務(wù)的公司。
病毒包裝技術(shù)服務(wù)病毒包裝技術(shù)服務(wù)(DH0010)一、服務(wù)介紹重組病毒以其高效和多樣性,是非常有效的將外源基因?qū)爰?xì)胞的方法。慢病毒腺病毒腺病毒相關(guān)表達(dá)特點(diǎn)穩(wěn)定表達(dá)瞬時(shí)表達(dá)瞬時(shí)表達(dá)是否整合到基因組是否否免疫原性弱強(qiáng)弱病毒**力高很高高注:高濃度時(shí)可能有極少量整合發(fā)生。二、服務(wù)內(nèi)容及價(jià)格服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價(jià)格服務(wù)周期(工作日)DH0010-1慢病毒包裝咨詢咨詢DH0010-2腺病毒包裝咨詢咨詢DH0010-3腺相關(guān)病毒包裝咨詢咨詢注:根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)需要靈活定制病毒載體包裝服務(wù),滿足客戶研究的多種需要。三、客戶提供1.客戶需提供生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞株及其他**(處理細(xì)胞**)實(shí)驗(yàn)材料(默認(rèn)由我方提供)2.靶基因信息。3.實(shí)驗(yàn)前,客戶需告知具體的細(xì)胞處理方式及詳細(xì)要求。注:若有特殊處理的樣品,請(qǐng)盡可能出示相關(guān)材料(具有保密性的材料除外)。四、服務(wù)流程1)根據(jù)目的基因相關(guān)信息(序列,序列號(hào)等),對(duì)每條目的設(shè)計(jì)3條mRNA序列,其中一條序列為陰性對(duì)照組;2)根據(jù)設(shè)計(jì)好的mRNA序列,設(shè)計(jì),合成兩條互補(bǔ)的短片段的DNA;3)對(duì)合成好的DNA進(jìn)行片段稀釋,退火,連接到線形化處理過(guò)的載體,轉(zhuǎn)化,涂平板,過(guò)夜培養(yǎng);4)通過(guò)PCR的方法篩選陽(yáng)性菌落,進(jìn)行測(cè)序。
細(xì)胞內(nèi)吞檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞檢測(cè)服務(wù)(DH0013)一、服務(wù)介紹1)無(wú)菌條件下,將DiI-LDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至25-50μg/ml。2)加入活細(xì)胞內(nèi),37℃培養(yǎng)4-5小時(shí)。3)孵育結(jié)束,吸去含有HumanDiI-LDL的培養(yǎng)基,并用無(wú)探針的培養(yǎng)基洗幾次。4)細(xì)胞固定5)熒光顯微鏡拍照二、服務(wù)內(nèi)容及價(jià)格服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價(jià)格服務(wù)周期(工作日)DH0013細(xì)胞內(nèi)吞檢測(cè)服務(wù)(DIL-Ac-LDL)咨詢咨詢?nèi)?、客戶提?.符合實(shí)驗(yàn)要求的細(xì)胞藥品(包括說(shuō)明書(shū))(可代為購(gòu)買),若無(wú)任何說(shuō)明,默認(rèn)由本公司提供。四、提交給客戶結(jié)果1、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告一份,包括實(shí)驗(yàn)流程、數(shù)據(jù)和圖片等2、結(jié)果分析報(bào)告五、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明1.實(shí)驗(yàn)周期:具體需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定。2.對(duì)實(shí)驗(yàn)有特殊要求,請(qǐng)另詢價(jià)。3.雙方簽訂合同后,收取50%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。血管疾病發(fā)生一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。
液體活檢三大標(biāo)志物之一的外泌體(exosomes),近幾年研究熱度持續(xù)攀升。有關(guān)外泌體載藥、診斷、免疫療法等方向的文章陸續(xù)發(fā)表在Science、Nature等各大期刊上,外泌體已成為生命科學(xué)/基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的一大熱點(diǎn)。外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號(hào)通訊的途徑,不同的細(xì)胞通過(guò)分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊,這些外泌體被受體細(xì)胞吸收,通過(guò)物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號(hào)的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過(guò)以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別,從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合,將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去,此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性,例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過(guò)胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑,外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)血液等體液運(yùn)輸而被遠(yuǎn)處組織細(xì)胞攝取,進(jìn)而影響目的細(xì)胞的基本功能和基因表達(dá)。幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體,不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能,這些外泌體參與了一系列生理和病理過(guò)程。胃平滑肌細(xì)胞的主要作用是通過(guò)肌肉的收縮蠕動(dòng)向胃內(nèi)推進(jìn)食物。北京非酒肝原代細(xì)胞分離培養(yǎng)哪家好
SD大鼠腎足細(xì)胞原代細(xì)胞標(biāo)記。上海品質(zhì)好的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)哪家好
原理過(guò)表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系(OverexpressionStableCellLines)的構(gòu)建利用慢病毒轉(zhuǎn)染、電轉(zhuǎn)等技術(shù)手段將特定的基因序列整合到宿主細(xì)胞的染色體上,使得目的基因能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期且穩(wěn)定的表達(dá)。用途基因功能研究、免疫/殺傷/增殖等、抗體藥物的活性篩選(細(xì)胞水平的結(jié)合和阻斷)、CAR分子的殺傷活性評(píng)價(jià)。材料與儀器(以慢病毒pMSCV載體為例)包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質(zhì)粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質(zhì)粒、GAG質(zhì)粒、VSV質(zhì)粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細(xì)胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構(gòu)建1)根據(jù)目的基因mRNA編碼區(qū)設(shè)計(jì)引物,分別在引物兩端加入酶切位點(diǎn)EcoRI和BglII。2)從細(xì)胞中提取目的基因mRNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后從cDNA里面用引物把目的基因的CDS區(qū)擴(kuò)增出來(lái)。PCR擴(kuò)增出帶有酶切位點(diǎn)的目的基因編碼區(qū)序列,連接至pMD19-T載體后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)菌DH5α,分別進(jìn)行菌落PCR鑒定和酶切鑒定。3)使用EcoRI和BglII雙酶切下目的基因序列,電泳割膠回收純化,連接到pMSCV-eGFP載體。再次轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)菌DH5α,菌落PCR鑒定和酶切鑒定成功后,送至公司測(cè)序、鑒定。4)鑒定成功后,將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)菌DH5α中。上海品質(zhì)好的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)哪家好