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來源: 發(fā)布時間:2021-09-06

芯片與常規(guī)切片免疫組化標記的比較 常規(guī)制片免疫組化陰性,而組織芯片免疫組化陽性者包括ER2例,PR1例;常規(guī)制片免疫組化陽性,而組織芯片免疫組化陰性者包括nm23、Her-2各1例。而部分病例常規(guī)制片免疫組化和組織芯片免疫組化陽性表達強度略有不同。組織芯片的免疫組化結(jié)果與常規(guī)制片免疫組化比較,統(tǒng)計學(xué)處理差異無顯現(xiàn)性。3.3 規(guī)格組織芯片免疫組化效果的比較 在本觀察中,使用1.0mm大小的組織芯進行免疫組化染色所得的結(jié)果和使用0.5mm組織芯所得結(jié)果一致,表明組織芯大小并不影響實驗結(jié)果,關(guān)鍵是在組織芯片制作過程中認真觀察原始常規(guī)切片,選取表示性區(qū)域并準確標記,在受體蠟塊相應(yīng)位置采取組織芯塊。在同樣面積的芯片,可以排列較多數(shù)量的小尺寸組織芯塊,較容易包含大量研究病例專業(yè)從事免疫實驗的整體方案。黑龍江組織免疫組化公司哪家好

DAB顯色

背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時間,到出現(xiàn)特異性染色較強而本底著色較淺時即可沖洗;DAB顯色時間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間;此外,若很短時間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長封閉時間;DAB顯色時間很長(如超過十幾分鐘)才出現(xiàn)陽性染色,一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短(比較好一抗4℃過夜);另一方面就是封閉時間過長。


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    —20℃)凍存——應(yīng)選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍,而后分裝10μl/瓶→凍存(-20℃)于冰箱備用。④關(guān)于Ab保存應(yīng)參照說明書。(3)Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低,因為Ag-Ab結(jié)合需在一定濃度范圍內(nèi)進行,若一方過剩則形成復(fù)合物小且少;極過剩時已形成的復(fù)合物亦會解體而呈現(xiàn)假陰性?!⒎茿b濃度越高越好。3.Ab滴片技術(shù)——所滴的抗體應(yīng)與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干,但不能干片。要領(lǐng):甩凈組織周圍的水。4.PBS洗滌技術(shù)(1)洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(yīng)(平時Ab不可靠很純)(2)方法:洗三次,每次5分鐘。5.Ab孵育技術(shù)(1)必須在濕盒內(nèi)進行,以防抗體的蒸發(fā)和干片。(2)溫度與時間4℃:過夜;37℃:2hor參考說明書6.光鏡控制顯色方法(1)室內(nèi)操作:注意溫度與時間的關(guān)系,室溫較宜5分鐘。(2)染色稍淺亦可拿出,脫水,封片后顏色可加深。對照組和染色結(jié)果的評價從以下幾個方面綜合評價:1.陽性染色特點①Ag定位,胞漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。(非特異性~細胞與組織無區(qū)別)②染色強度不同:顏色深淺不一。

復(fù)染

目的是形成細胞輪廓,從而更好地對目標蛋白進行定位,經(jīng)常用蘇木素復(fù)染(胞核染料)。注意蘇木素復(fù)染時間要看當時的室溫、溶液的新舊、目標抗原的定位等情況,一般數(shù)秒-數(shù)分鐘,胞漿蛋白可以適當時間長一點,而胞核算白則要短。不過這個如果染色不理想可以補救的。方法是:染色深則分化時間稍長些即可;染色淺則再置于蘇木素中染色即可。鹽酸酒精是分化,氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗,然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒(一定動作要快)后拿出流水振洗,在放入氨水中返蘭即可。


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固定若想得到理想的ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細胞內(nèi)的位置,除需有良好酶和抗體外,保持組織細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動性(Immobility)和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之,如果抗原物質(zhì)在組織細胞間彌散、丟失或失去免疫活性,無論如何努力染色都是徒勞的,所以說固定是ICC染色中非常重要的一環(huán)。ICC與其它組織學(xué)技術(shù)不同,除要求保存良好的結(jié)構(gòu)外,還需保存組織抗原的免疫活性。一般認為,新鮮組織能夠比較大限度地保存組織抗原的免疫活性,但結(jié)構(gòu)較差,易出現(xiàn)抗原彌散丟失現(xiàn)象。Cumming(1980)報告,不固定的組織切片ICC染色時,環(huán)鳥苷酸含量丟失80%以上免疫組化切片 不掉片,厚薄均勻哪里好找上海融享生物。天津免疫組化公司電話

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免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后,所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現(xiàn),使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規(guī)范化。免疫組化標準化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù),任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后,所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要,隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現(xiàn),使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規(guī)范化。免疫組化標準化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù),任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題,都可以直接影響免疫組化結(jié)果。黑龍江組織免疫組化公司哪家好

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