分類(lèi)
1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類(lèi)，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2）按染色步驟可分為直接法（又稱(chēng)一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。
3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶（PAP）法；親和連接，如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。
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如肽類(lèi)、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等等均可用免疫組織化學(xué)方法顯示，因而目前在基礎(chǔ)與臨床科研中被廣泛應(yīng)用。較近幾年，分子生物學(xué)研究異?；钴S，但較終還要?dú)w到形態(tài)上來(lái)。用免疫組織化學(xué)方法對(duì)所研究的大分子分子進(jìn)行定位，進(jìn)而深入研究其功能。免疫組化技術(shù)免疫組織化學(xué)編輯染色方法1．直接法熒光素直接標(biāo)記特異性抗體（—抗）上，標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合（在切片上）熒光顯微鏡下觀(guān)察→檢測(cè)抗原?！髅笜?biāo)抗體要顯示后鏡檢。直接法優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單，時(shí)間短，特異性強(qiáng)。缺點(diǎn)：靈敏度低，所需抗體量大（不經(jīng)濟(jì)）。應(yīng)用：基本不用！2．間接法熒光素標(biāo)記在二抗上（二抗：抗產(chǎn)生一抗動(dòng)物的IgG抗體）。※顯色后鏡檢特點(diǎn)：較直接法靈敏，可標(biāo)記一種抗體→鑒定多種抗原。3．非標(biāo)記Ab橋法：“橋法”是酶標(biāo)記抗體的改進(jìn)，經(jīng)過(guò)三次抗體，其二抗為未標(biāo)記橋抗體。（1）單橋法(2)雙橋法在三抗之后，將二抗和三抗再重復(fù)一次，可增大染色強(qiáng)度。★特別提示：注意動(dòng)物種屬關(guān)系4．PAP法（過(guò)氧化物酶—抗過(guò)氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod，PAP法）~是橋法的改良，既先形成PAP復(fù)合物→抗原—抗體—抗IgG抗體—PAP復(fù)合物。該法簡(jiǎn)化了操作步驟，提高了靈敏度。內(nèi)蒙古病理切片免疫組化檢查機(jī)構(gòu)上海免疫組化，HE染色，免疫熒光找融享生物科技有限公司。
減少或消除非特異性染色的方法 組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽(yáng)性染色稱(chēng)為非特異性背景染色，較好常見(jiàn)的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動(dòng)物之非免疫血清（1：5-1：20）封閉組織上帶電荷基團(tuán)而除去與首先抗體非特異性結(jié)合。必要時(shí)可加入2%-5%牛血清白蛋白，可進(jìn)一步減少非特異性染色。作用時(shí)間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動(dòng)物血清（非免疫的）。有明顯溶血的血清不能用，以免產(chǎn)生非特異性染色。免疫熒光染色時(shí)，可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對(duì)消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當(dāng)然使用特異性高、效價(jià)高的首先抗體是較好重要的條件。洗滌用的緩沖液中加入0.85%~1%NaCl成為高鹽溶液,充分洗滌切片,能有效的減少非特異性結(jié)合而減少背景染色。
免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理—抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。免疫組化等病理實(shí)驗(yàn)服務(wù)找融享生物 。
陰性染色產(chǎn)生的原因有:
⑴一抗和二抗?jié)舛炔缓线m或孵育條件不妥。
⑵熒光素提前衰退。熒光素質(zhì)量不佳或操作過(guò)程中沒(méi)有注意避光等防止熒光素衰退的事項(xiàng)。
⑶血清封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
⑷抗體稀釋液PH值不合適，影響抗原抗體反應(yīng)。
⑸組織切片不平、裂片或脫片很?chē)?yán)重，易引起大塊陰性著色。
⑹組織標(biāo)本不新鮮或已經(jīng)冷凍組織制成的切片中抗原易彌散，易引起本來(lái)表達(dá)的部位陰性染色或弱著色。
⑺熒光顯微鏡不會(huì)使用，激發(fā)波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤。
免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理--抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。 病理實(shí)驗(yàn)免疫組化專(zhuān)業(yè)設(shè)備，真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。北京免疫學(xué)免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有
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定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合
該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀(guān)察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。
7、從蛋白水平檢測(cè)角度，免疫組化技術(shù)與Western blotting、ELISA的異同
1）Western blotting
蛋白質(zhì)免疫印跡，也是利用抗體抗原反應(yīng)原理，結(jié)合化學(xué)發(fā)光等技術(shù)來(lái)檢查組織或細(xì)胞樣品內(nèi)蛋白含量的檢測(cè)方法。與免疫組化技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確；當(dāng)然Western blotting也可定性和定位（通過(guò)提取膜蛋白或核酸白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位），但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于免疫組化技術(shù)。
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