ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)是一種快速檢測(cè)臨床和實(shí)驗(yàn)樣品中蛋白質(zhì)含量的方法，根據(jù)研究需求，有許多方式可供選擇，如直接ELISA，間接ELISA，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA和夾心ELISA等。ELISA是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的一種技術(shù)，其具有快速、易于操作等優(yōu)點(diǎn)，但當(dāng)條件不合適時(shí)，其往往不能給出*佳的結(jié)果，不能保持一致性和可復(fù)制性。
ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡(jiǎn)稱，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶進(jìn)行直接或間接結(jié)合，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，進(jìn)行定性和定量分析。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了該方法用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。
ELISA大致分為五種類型：直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法、捕獲包被法。
油紅O是一種脂溶性重氮染料，用于染色細(xì)胞和組織中的脂質(zhì)和脂肪沉積物。代謝物檢測(cè)試劑盒
Elisa試劑盒對(duì)于間接ELISA標(biāo)本般都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí)，很小的絕dui誤差，會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差，使陰性（或弱陽(yáng)性）標(biāo)本呈陽(yáng)性（或陰性）。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目，大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健步，ELISA試劑盒應(yīng)引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機(jī)器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。 提取純化試劑盒它們的工作原理是綁定到特定的靶點(diǎn)(稱為表位)上，這些靶點(diǎn)位于抗原的表面。
細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過(guò)對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。
細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗**藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)，另外也可以通過(guò)Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。
競(jìng)爭(zhēng)法也是一種很常用的方法，一起看看：
競(jìng)爭(zhēng)法（Competitive ELISA）是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標(biāo)抗體/抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的分析方法。當(dāng)游離抗體（或抗原）濃度越高，則能與固定抗原（或抗體）結(jié)合的酶標(biāo)抗體（或抗原）就越少，后續(xù)顯色就越淺，即與對(duì)照相比，顯色越淺，表示檢測(cè)樣本中抗體（或抗原）含量越高。
該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測(cè)也可用于檢測(cè)比較不純的樣本，且重復(fù)性好，但是檢測(cè)的靈敏度和專一性較差。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原常用于檢測(cè)小分子抗原及半抗原，這類抗原通常缺乏兩個(gè)以上的識(shí)別位點(diǎn)，不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測(cè)定。該方法在商業(yè)化ELISA試劑盒中被廣fan運(yùn)用。 這些檢測(cè)試劑盒旨在為細(xì)胞裂解液中的總特異性磷酸化修飾或切割位點(diǎn)蛋白質(zhì)提供準(zhǔn)確、靈敏和快速蛋白質(zhì)定量。
CCK-8試劑（Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑 [1] ）中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。使用ELISA讀數(shù)器對(duì)溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。時(shí)間測(cè)定試劑盒
熒光亮度更高，熒光偶聯(lián)物特異性好，熒光溢出效應(yīng)減弱。代謝物檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)流程：1根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號(hào)等），構(gòu)建含有外源基因或siRNA的重組載體。2對(duì)于測(cè)序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)du素的重組質(zhì)粒。3使用高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T 細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；4濃縮、純化病毒液。5用高質(zhì)量的病毒液感ran細(xì)胞。6通過(guò)定量PCR精確測(cè)定病毒滴度（高精確滴定方法）和Western 分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。7用高質(zhì)量的病毒液感ran宿主細(xì)胞；檢測(cè)基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選，通常狀況下，篩選的細(xì)胞克隆株具有長(zhǎng)期的表達(dá)穩(wěn)定性。bing毒液足夠用于一般的動(dòng)物活ti實(shí)驗(yàn)。代謝物檢測(cè)試劑盒
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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。