數(shù)字PCR采用的策略概括起來非常簡(jiǎn)單，就是“分而治之”（divide and conquer），這種做法非常類似于計(jì)算機(jī)科學(xué)中的“分治算法”，將一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到大量微小的反應(yīng)器中，在每個(gè)反應(yīng)器中包含或不包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子( DNA模板) ，實(shí)現(xiàn)“單分子模板PCR擴(kuò)增”，擴(kuò)增結(jié)束后，通過陽性反應(yīng)器的數(shù)目“數(shù)出”目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。在實(shí)際的數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)中，事實(shí)上是通過呈現(xiàn)兩種信號(hào)類型的反應(yīng)器比例和數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算出原始樣本中的模板拷貝數(shù)。微反應(yīng)單元體積越均一穩(wěn)定、數(shù)量相對(duì)越多，定量的整體精度就越高。山東數(shù)字PCR口碑推薦
甲基化分析：DNA甲基化是哺乳動(dòng)物DNA的一種常見表觀遺傳修飾，它通過調(diào)節(jié)細(xì)胞中的基因表達(dá)從而在發(fā)育和疾病過程中發(fā)揮了重要的作用。異常的DNA甲基化涉及整個(gè)基因組的整體低甲基化和位于基因啟動(dòng)子區(qū)域和基因間DNA的CpG島的局部超甲基化，這是人類惡性**中一個(gè)常見的表觀遺傳改變。基于PCR的方法已經(jīng)被***的應(yīng)用于DNA甲基化的評(píng)估，其原理是先采用亞硫酸氫鹽來處理DNA，這會(huì)通過脫氨基作用將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)換為尿嘧啶，然后設(shè)計(jì)與這些DNA進(jìn)行特異結(jié)合的引物和探針進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。然而，傳統(tǒng)的PCR檢測(cè)容易受到PCR抑制劑的影響，在非甲基化等位基因的背景下進(jìn)行稀有甲基化等位基因檢測(cè)的敏感性有限。而數(shù)字PCR是在無數(shù)個(gè)**的分隔之中進(jìn)行反應(yīng)，因此彼此之間較少受到抑制劑的影響，能夠?qū)鹘y(tǒng)方法檢測(cè)不到的罕見甲基化等位基因進(jìn)行精細(xì)的檢測(cè)，未來有望將DNA甲基化作為一個(gè)具有區(qū)域性*變的預(yù)測(cè)指標(biāo)或者**風(fēng)險(xiǎn)生物標(biāo)志物來使用。云南核酸拷貝數(shù)定量數(shù)字PCR通過鎖核酸修飾的引物增強(qiáng)了對(duì)互補(bǔ)序列的親和力和特異性，即使是微小表達(dá)差異也可以輕松檢測(cè)。
數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術(shù)是一種新的核酸檢測(cè)和定量方法，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術(shù)不同，數(shù)字PCR采用***定量的方式，不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本，直接檢測(cè)目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測(cè)方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性，dPCR迅速得到***的應(yīng)用，這項(xiàng)技術(shù)在極微量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜背景下稀有突變檢測(cè)和表達(dá)量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢(shì)已被普遍認(rèn)可，而其在基因表達(dá)研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標(biāo)志物稀有突變檢測(cè)、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定、NGS測(cè)序文庫精確定量和結(jié)果驗(yàn)證等諸多方面具有的廣闊應(yīng)用前景已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。
雖然數(shù)字PCR的優(yōu)勢(shì)與臨床應(yīng)用前景已在許多研究中得到確認(rèn)，但想要進(jìn)一步在臨床廣泛應(yīng)用，數(shù)字PCR需要針對(duì)以下幾個(gè)方面進(jìn)行升級(jí)：商用數(shù)字PCR系統(tǒng)需要進(jìn)一步提升樣本檢測(cè)通量以充分滿足COVID-19普篩的需求；需要制定國家或行業(yè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；需要產(chǎn)業(yè)界進(jìn)一步降低設(shè)備成本；基于數(shù)字PCR的**檢測(cè)試劑盒需要經(jīng)過嚴(yán)格多中心評(píng)價(jià)，并獲得NMPA、FDA、CE等監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)證。隨著科研和產(chǎn)業(yè)的持續(xù)研發(fā)和投入，未來數(shù)字PCR將在實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院得到更多的應(yīng)用，用于解決科研和臨床問題，提供更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。數(shù)字PCR有望成為下一代分子診斷的**技術(shù)。外泌體里面的micRNA含量是非常低的。
從上世紀(jì)90年代以來qPCR技術(shù)的爆發(fā)式發(fā)展使得現(xiàn)代核酸檢測(cè)技術(shù)具有全新的面貌，而進(jìn)入二十一世紀(jì)之后，速度更快、通量更高。成本更低的DNA測(cè)序技術(shù)正在迅速發(fā)展，也是目前競(jìng)爭(zhēng)**為激烈的研究領(lǐng)域之一，即使在這種情況下，dPCR技術(shù)仍然以其高度的靈敏性和特異性在諸多科學(xué)領(lǐng)域爭(zhēng)取到屬于自己的一席之地。即使在一些傳統(tǒng)的qPCR應(yīng)用領(lǐng)域，也有一些實(shí)驗(yàn)室同時(shí)選擇dPCR平臺(tái)進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和可重復(fù)性。在基因組變異研究領(lǐng)域，群體基因組水平上的SNP（Single Nucleotide Polymorphism，單核苷酸多態(tài)性）檢測(cè)面臨的問題主要是突變序列往往與大量正常序列同時(shí)存在，競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)嚴(yán)重影響突變序列的檢測(cè)精度，數(shù)字PCR技術(shù)帶來的極高的擴(kuò)增特異性在稀有突變檢測(cè)方面具有天然的優(yōu)勢(shì)，在**標(biāo)志物檢測(cè)、無創(chuàng)產(chǎn)前檢查、線粒體突變檢測(cè)等研究方向上，我們已經(jīng)看到dPCR的許多精彩表現(xiàn)。常見的300種人、小鼠和大鼠基因表達(dá)Assay均已在QIAcuity數(shù)字PCR平臺(tái)上經(jīng)過驗(yàn)證。浙江高精確度數(shù)字PCR售后分析
數(shù)字PCR可以用來研究基因表達(dá)。山東數(shù)字PCR口碑推薦
（5）在SARS-CoV-2核酸參考品制備中，數(shù)字PCR能夠?qū)怂徇M(jìn)行精確的定量，能夠提高世界各國SARS-CoV-2核酸測(cè)量結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性。（6）數(shù)字PCR能夠靈敏檢測(cè)與定量環(huán)境中的病毒RNA濃度，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本（如公共區(qū)域、病房、醫(yī)院衛(wèi)生間、實(shí)驗(yàn)室操作員手套、廢水等等）。（7）在實(shí)驗(yàn)室樣品與臨床樣品病毒突變檢測(cè)中，數(shù)字PCR適合用于已知的SARS-CoV-2遺傳變異檢測(cè)，特別是對(duì)于一些低頻突變。（8）在抗病毒藥物的研發(fā)過程中，病毒載量的變化是評(píng)估藥物有效性的重要指標(biāo)，借由數(shù)字PCR提供的***定量結(jié)果，能夠給出更具說服力和準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)結(jié)果。山東數(shù)字PCR口碑推薦