**技術(shù)參數(shù)：決定實驗精度與可靠性：1. 溫控性能控溫范圍：需覆蓋 4-100℃，滿足變性（94-96℃）、退火（50-65℃）、延伸（72℃）全流程需求?？販鼐龋骸?.1-0.5℃為優(yōu)，精度不足可能導(dǎo)致引物非特異性結(jié)合或酶活性降低（如退火溫度波動易引發(fā)假陽性）。溫度均勻性：各孔位溫差≤0.5℃，若均勻性差，同批次樣本擴增效率可能不一致，影響結(jié)果重復(fù)性。升降溫速率：常規(guī) PCR 儀速率為 3-8℃/s，高速機型可達(dá) 10℃/s 以上，可縮短單循環(huán)時間（如 30 個循環(huán)從 2 小時壓縮至 1 小時）。2. 反應(yīng)模塊兼容性樣本通量：低通量：單管、8 聯(lián)管（適合少量樣本，如科研初篩、臨床單樣本檢測）；中高通量：96 孔板（常規(guī)批量檢測）、384 孔板（超高通量，如基因芯片預(yù)處理）。梯度功能：梯度 PCR 儀可在同一模塊設(shè)置 3-5℃的溫度梯度（如 55-60℃），用于優(yōu)化引物退火溫度，減少預(yù)實驗次數(shù)。支持多重?zé)晒鈾z測，能夠同時監(jiān)測多個靶標(biāo)，提升實驗的通量和效率。南京普通基因擴增儀PCR儀廠家

多重 PCR 與多基因檢測場景：同時擴增多個靶基因（如病原體分型、遺傳標(biāo)記檢測），需平衡不同引物對的退火溫度。例：在 HPV 分型檢測中，使用梯度 PCR 優(yōu)化 14 種型別引物的共同退火溫度，避免因單一溫度導(dǎo)致部分型別漏檢。 科研方法開發(fā)與驗證場景：建立新的 PCR 檢測方法（如巢式 PCR、實時熒光定量 PCR 的預(yù)實驗）時，需系統(tǒng)優(yōu)化溫度、時間、酶濃度等參數(shù)。例：開發(fā)某**突變基因的檢測方法時，通過梯度功能同時測試 3 個不同退火溫度和 2 種酶濃度組合，共 6 種條件，快速確定比較好反應(yīng)體系。江蘇基因擴增儀PCR儀柏恒RePure系列PCR儀在擴增效果上表現(xiàn)出色，能夠準(zhǔn)確、可靠地擴增目標(biāo)DNA序列。

引物設(shè)計與條件優(yōu)化場景：新引物開發(fā)時，需測試不同退火溫度（Tm 值）以避免非特異性擴增。例：針對某基因設(shè)計 5 對引物，通過梯度 PCR 同時測試每對引物在 55℃~65℃范圍內(nèi)的比較好退火溫度，直接篩選出特異性條帶**亮的組合。優(yōu)勢：傳統(tǒng)方法需多次**實驗，梯度 PCR *需 1 次運行即可完成多條件驗證。復(fù)雜模板的擴增優(yōu)化場景：擴增富含 GC 堿基對（>70%）的模板、長片段 DNA（>5kb）或存在二級結(jié)構(gòu)的序列時，需精細(xì)優(yōu)化溫度參數(shù)。例：擴增某病毒全基因組（約 15kb）時，通過梯度功能測試不同延伸溫度（如 68℃~72℃）對產(chǎn)物完整性的影響，確定比較好延伸條件。

啟動反應(yīng)與結(jié)果分析確認(rèn)參數(shù)無誤后，啟動 qPCR 程序，儀器自動運行并實時顯示熒光曲線。反應(yīng)結(jié)束后，通過軟件查看結(jié)果：定量結(jié)果：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算未知樣本的初始模板濃度（定量），或通過 ΔΔCt 法分析相對表達(dá)量（相對定量）。溶解曲線：若出現(xiàn)單一尖銳峰，說明擴增特異性良好；若有雜峰，需排查引物或反應(yīng)條件問題。 污染防控（重點）核酸污染：嚴(yán)格分區(qū)操作：將試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR 擴增區(qū)分開，避免交叉污染。使用濾芯吸頭，每次加樣后更換吸頭，避免移液器接觸樣本或試劑瓶口。定期用 10% 次氯酸鈉或 DNA 酶清潔實驗臺面、移液器和儀器樣品槽，紫外燈照射消毒操作區(qū)（30 分鐘以上）。試劑污染：試劑分裝保存（避免反復(fù)凍融），陰性對照（無模板）和空白對照（無菌水）必須設(shè)置，以監(jiān)測是否污染。RePure系列PCR儀能快速找到合適的退火溫度，顯著提高了實驗的成功率和可靠性。

放入 PCR 儀：將配置好的反應(yīng)管放入基因擴增儀 PCR 儀中，按照設(shè)定的程序進行擴增反應(yīng)。設(shè)置擴增程序：一般包括預(yù)變性、變性、退火、延伸和終延伸等步驟。預(yù)變性步驟通常在 94℃-95℃下進行 5-10 分鐘，使 DNA 雙鏈充分解開；變性溫度一般為 94℃-95℃，時間為 30-60 秒，使模板 DNA 雙鏈解鏈；退火溫度根據(jù)引物的 Tm 值確定，一般在 50℃-65℃之間，時間為 30-60 秒，使引物與模板 DNA 特異性結(jié)合；延伸溫度通常為 72℃，時間根據(jù)擴增片段長度而定，一般為 1-2 分鐘 /kb；終延伸步驟在 72℃下進行 5-10 分鐘，確保所有擴增產(chǎn)物延伸完整。循環(huán)次數(shù)一般為 30-40 次。RePure-(D)B在同一次實驗中測試多個不同溫度下的反應(yīng)效果，提高實驗的成功率。南京普通基因擴增儀PCR儀廠家

RePure-T三槽PCR出色的熱發(fā)散設(shè)計不僅提升了儀器的穩(wěn)定性，還延長了設(shè)備的使用壽命.南京普通基因擴增儀PCR儀廠家

準(zhǔn)備試劑：準(zhǔn)備 PCR 反應(yīng)所需的各種試劑，包括 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、緩沖液、引物、Mg2?等。引物是決定 PCR 特異性的關(guān)鍵因素，需根據(jù)待檢測的轉(zhuǎn)基因成分的特定基因序列設(shè)計合成特異性引物。配置反應(yīng)液：按照一定的比例和順序，將各種試劑加入到無菌的 PCR 管中，配置成 PCR 反應(yīng)體系。一般反應(yīng)體系包括 10×PCR 緩沖液、2.5mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl?、10μmol/L 引物、5U/μL Taq DNA 聚合酶以及適量的模板 DNA，總體積通常為 20μL 或 50μL。南京普通基因擴增儀PCR儀廠家