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單分子級(jí)別數(shù)字ELISA靈活

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-06-04

創(chuàng)新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA

我公司推出的數(shù)字化高靈敏ELISA芯片檢測產(chǎn)品應(yīng)用場景:適合生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、科研市場、產(chǎn)品預(yù)研、產(chǎn)品開發(fā)、ELISA檢測、動(dòng)物病情檢測等各種應(yīng)用場景應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產(chǎn)品。

將200,000個(gè)功能化DNA捕獲探針與100μL孵育含有目標(biāo)DNA的溶液(5‘-TTGACGGCGAAGACCTGGATGTATTGCTCCTCTGAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘孵育2小時(shí)后,移除DNA靶標(biāo)溶液,用0.2×SSC緩沖液洗滌珠子三次含有0.1%Tween-20的微球重新懸浮并與10nM混合生物素標(biāo)記的信號(hào)探針(5‘-TACATCCAGGTCTTCGCCGTCAA/生物素/-3’)對(duì)目標(biāo)DNA具有特異性,孵育1小時(shí)。然后將珠子在去除信號(hào)探針后用含0.1%吐溫-20的0.2×SSC緩沖液洗滌三次。隨后向珠子沉淀中加入10pMS阝G溶液,混勻并混合1小時(shí)。然后將珠子分離并在含0.1%吐溫-20的5×PBS緩沖液中洗滌六次。重懸于10μLofPBS中并加載到飛升微升孔陣列上。 數(shù)字化高敏ELISA芯片,可以進(jìn)行8孔、4孔的靈活檢測。單分子級(jí)別數(shù)字ELISA靈活

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在前列腺切除術(shù)后患者中,能夠準(zhǔn)確量化PSA水平的能力,即使在非常低的濃度(<300fM或10pg/mL)下,也應(yīng)提供如果PSA水平升高,早期提示復(fù)發(fā)17,29。圖4顯示PSA水平使用數(shù)字ELISA在30名接受治理性前列腺切除術(shù)且術(shù)后至少6周采集血液的患者血清中進(jìn)行測量。所有30例患者的血清PSA水平均低于商業(yè)檢測限采用PSA數(shù)字ELISA(圖3A)對(duì)全血清樣本進(jìn)行稀釋1:4后測定,成功檢測到所有30例患者中PSA,濃度范圍為14fg/mL至9.4pg/mL,平均濃度為1.5pg/mL。需要進(jìn)一步的臨床研究來確定在RP患者中測量PSAfg/mL水平的診斷益處。 微型數(shù)字ELISA開放6)數(shù)字化高敏ELISA芯片試劑盒,10ul樣本可同時(shí)測2-4個(gè)指標(biāo);

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芯棄疾JX-8B數(shù)字化高靈敏ELISA芯片檢測產(chǎn)品;應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產(chǎn)品。

生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室常見問題:ELISA使用繁瑣、用時(shí)長、樣本用量大、使用不夠靈活。使用方法比較繁多,用時(shí)長,每次檢測可能要花幾個(gè)小時(shí),經(jīng)常半天就測試了一輪工藝;如果要根據(jù)結(jié)果來改善,就得再花上半天、一天;使用和實(shí)驗(yàn)安排不夠靈活。ELISA試劑盒每次購買和使用,大多都要以整版方式進(jìn)行,不夠靈活。

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通過在離散的飛升微孔陣列中分離和檢測單個(gè)免疫復(fù)合物,實(shí)現(xiàn)數(shù)字ELISA已使在亞細(xì)胞水平上測量血清中臨床重要的蛋白質(zhì)成為可能飛摩爾濃度。我們認(rèn)為,與之前報(bào)道的方法相比,數(shù)字ELISA表現(xiàn)出的不敏感性改善將轉(zhuǎn)化為診斷上的好處。例如,在本研究中測定的30個(gè)RP樣品中有9個(gè)樣品的PSA水平低于基于納米顆粒標(biāo)簽的先前比較高靈敏度PSA測定的LOD17。 芯棄疾單分子芯片依托單分散陣列化技術(shù),實(shí)現(xiàn)飛克級(jí)高靈敏檢測,可捕獲數(shù)十萬反應(yīng)磁珠。

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每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測

數(shù)字ELISA測量蛋白質(zhì)濃度遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA的能力源于兩種效應(yīng):1)SiMoA對(duì)酶標(biāo)記的高度敏感性;以及2)通過數(shù)字化蛋白質(zhì)檢測可以實(shí)現(xiàn)的低背景信號(hào)。任何免疫測定的靈敏度由其靈敏度決定。檢測技術(shù)到標(biāo)簽,抗體親和力,試驗(yàn)背景,以及背景測量值的變異(%CV)27.SiMoA對(duì)酶非常敏感標(biāo)簽(圖2)為在數(shù)字ELISA中檢測亞飛摩爾濃度的標(biāo)記蛋白提供了基礎(chǔ)。也就是說,對(duì)于給定親和力的抗體,其靈敏度為免疫測定將由測定背景決定,SiMoA的高標(biāo)記靈敏度有助于降低這種背景。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明,數(shù)字ELISA的背景來自于檢測抗體和酶的非特異性結(jié)合(NSB)與捕獲珠表面結(jié)合(補(bǔ)充表2)。AsSiMoA相比傳統(tǒng)檢測方法具有更高的標(biāo)記靈敏度,明顯減少了檢測抗體(~1nM)和酶標(biāo)記物(1–50pM)的需要,以檢測結(jié)合事件,與傳統(tǒng)方法相比(標(biāo)記試劑濃度~10nM)。降低的標(biāo)記物濃度減少了NSB到捕獲表面,從而導(dǎo)致背景信號(hào)明顯降低。 抗體篩選芯片高效篩選抗體配對(duì),5μl 樣本即可測試多種組合,縮短研發(fā)周期。高科技數(shù)字ELISA檢測用時(shí)

單分子陣列化技術(shù)通過微米級(jí)結(jié)構(gòu)與二次流原理,穩(wěn)定捕獲磁珠,構(gòu)建 “芯片實(shí)驗(yàn)室” 模式。單分子級(jí)別數(shù)字ELISA靈活

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每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測

動(dòng)力學(xué)上,對(duì)于200,000個(gè)微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質(zhì)將在不到1min的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)散80μm。表明,在2小時(shí)的孵育過程中,蛋白質(zhì)分子的捕獲不會(huì)受到限制動(dòng)力學(xué)上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個(gè)珠子加載到50,000孔陣列中,通常會(huì)導(dǎo)致20,000–30,000個(gè)微球被困在1mL孔中。對(duì)于典型的背景信號(hào)為1%活性微球(見下文),這種裝載導(dǎo)致背景信號(hào)為200-300個(gè)活性微球檢測到,對(duì)應(yīng)于泊松噪聲的可接受變異系數(shù)(CV)為6-7%。第三,過高的微球濃度可能導(dǎo)致:a)非特異性結(jié)合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過低,導(dǎo)致活性微球的比例過低,從而導(dǎo)致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬到100萬顆珠子是比較好的數(shù)字ELISA。同時(shí),為了獲得可接受的背景信號(hào)(1%)和泊松噪聲)。 單分子級(jí)別數(shù)字ELISA靈活

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