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IF=12.5宇玫博熒光標(biāo)記染料助力客戶腎缺血再灌注損傷研究

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-05-07

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近期,來自四川大學(xué)華西醫(yī)院的魏鑫教授和宋涂潤教授團(tuán)隊(duì)在International Journal of Surgery雜志發(fā)表了題為“Human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles ameliorate kidney ischemia-reperfusion injury by suppression of senescent tubular epithelial cells: experimental study.”的科研論文,IF=12.5。

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研究背景:

腎臟移植(Kidney transplantation)是治療終末期腎病的最佳方法,但供體腎臟短缺的問題一直未解決。供體腎臟在移植過程中不可避免地會(huì)經(jīng)歷缺血和再灌注損傷,而邊緣供體腎臟更容易受損且自我修復(fù)能力較差,導(dǎo)致移植后腎臟相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生率較高。細(xì)胞衰老(Cellular senescence)是細(xì)胞在受到刺激后介于正常細(xì)胞和死亡細(xì)胞之間的一種狀態(tài),與組織損傷后的惡化和再生能力降低有關(guān)。在腎缺血再灌注損傷(ischemia/reperfusion Injury,IRI)中,細(xì)胞衰老的作用具有雙重調(diào)節(jié)功能,調(diào)節(jié)衰老細(xì)胞可能是改善供體腎臟結(jié)果的潛在治療靶點(diǎn)。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞衍生的外泌體(HUMSC-EVs)在免疫調(diào)節(jié)和組織微環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起重要作用,能夠通過減少氧化損傷、炎癥細(xì)胞因子表達(dá)、抑制細(xì)胞凋亡等機(jī)制改善腎臟IRI的預(yù)后。本文旨在研究HUMSC-EVs通過抑制腎小管上皮細(xì)胞衰老來實(shí)現(xiàn)保護(hù)腎臟IRI的機(jī)制,并探討了HUMSC-EVs與達(dá)沙替尼(dasatinib)和槲皮素(quercetin)聯(lián)合治療的潛在效果。

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研究成果及意義:

在本研究中,作者首先通過超速離心法分離得到HUMSC-EVs,并通過納米粒子示蹤分析(NTA)、透射電鏡(TEM)和標(biāo)志蛋白(WB)對其進(jìn)行鑒定。隨后作者使用人腎-2細(xì)胞(HK-2)模擬缺氧再氧合(H/R)模型來模擬腎臟IRI,檢測HUMSC-EVs對HK-2細(xì)胞的影響。結(jié)果表明,H/R處理的HK-2細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞增殖能力下降、細(xì)胞衰老標(biāo)志物(p53、p21、p16、SA-β-gal)表達(dá)增加、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯。又通過轉(zhuǎn)錄組測序探索其潛在調(diào)節(jié)機(jī)制,研究表明,HUMSC-EVs處理能顯著提高細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖能力,減少SABG陽性細(xì)胞數(shù)量,減輕細(xì)胞周期停滯,并降低細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白(p53、p21、p-γH2AX)的表達(dá),并且HUMSC-EVs通過調(diào)節(jié)Ras-ERK1/2信號通路來減輕HR誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞損傷。接著作者將成年雄性小鼠分為對照組、IRI組、HUMSC-EVs***組、衰老細(xì)胞清除劑(dasatinib和quercetin)***組和聯(lián)合***組(HUMSC-EVs和dasatinib和quercetin),檢測各組小鼠的腎功能、腎小管上皮細(xì)胞衰老特征、急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化情況。IHC實(shí)驗(yàn)和WB結(jié)果表明,IRI小鼠模型表現(xiàn)出腎功能下降、腎組織損傷、間質(zhì)纖維化和細(xì)胞衰老。腎臟包膜下注射HUMSC-EVs能顯著改善腎功能,減少腎小管上皮細(xì)胞的衰老特征,減輕急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化。HUMSC-EVs主要通過調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2依賴的凋亡來實(shí)現(xiàn)腎臟保護(hù),并通過調(diào)節(jié)Ras-pERK-Ets1-p53信號通路依賴的細(xì)胞衰老來減少腎小管萎縮和腎臟間質(zhì)纖維化??诜ダ霞?xì)胞清除劑dasatinib和quercetin也能減輕IRI誘導(dǎo)的腎臟損傷,而HUMSC-EVs和dasatinib和quercetin的聯(lián)合治療具有更好的腎臟保護(hù)效果。最終作者認(rèn)為在急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化方面,HUMSC-EVs通過調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老和凋亡來減輕腎臟IRI。HUMSC-EVs與衰老細(xì)胞清除劑的聯(lián)合***可提供更好的腎臟保護(hù)效果,為腎臟移植中的器官保護(hù)和組織修復(fù)提供了一種潛在的治療策略,為利用HUMSC-EVs和衰老細(xì)胞清除劑***腎臟IRI提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),可能有助于改善邊緣供體腎臟的質(zhì)量,擴(kuò)大供體器官池。


from clipboard該研究中使用本公司外泌體綠色熒光染料(PK67)(貨號:UR52303) 標(biāo)記HUMSC-EV的脂質(zhì)雙層,使用N-SIM S超分辨率顯微鏡(Nikon)觀察HK-2細(xì)胞對HUMSC-EV的體外攝取,確認(rèn)了PKH 67標(biāo)記的HUMSC-EV在37°C下被HK-2細(xì)胞成功內(nèi)化。

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該研究中使用本公司外泌體熒光染料DIR(貨號:UR21017)標(biāo)記HUMSC-EVS,在注射后2、7和28天進(jìn)行了體內(nèi)成像,使用IVIS SpectrumCT體內(nèi)成像系統(tǒng)(PerkinElmer)分析熒光強(qiáng)度,確認(rèn)了腎被膜下注射的DiR標(biāo)記的HUMSC-EV僅分布在腎區(qū)域中,并且解剖離體的腎臟成像系統(tǒng)顯示了相同的結(jié)果。


from clipboardfrom clipboard外泌體綠色熒光標(biāo)記染料(PKH67)-企業(yè)官網(wǎng)

參考文獻(xiàn):Human umbilical cord mesenchymal stem cellsderived extracellular vesicles ameliorate kidney ischemia-reperfusion injury by suppression of senescent tubular epithelial cells: experimental study. International Journal of Surgery. 2025 Jan 01;111(1):394-410.



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